金银花基因组DNA的提取与RAPD分析.pdfVIP

金银花基因组DNA的提取与RAPD分析 李峰1，汪锋1，郇宜俊2 (1山东中医药大学济南，250355；2临沂市中医院临沂276002) [摘要]目的：掌握金银花基因组DNA的提取方法，比较RAPD分析前后DNA图谱的变化．方法：采 用改良CTAB法提取金银花基因组DIqA并进行RAPD分析．结论：金银花基因组DNA扩增后，经琼脂糖凝胶 电泳后在紫外凝胶成像系统下观察，扩增前后基因谱带分布有变化． [关键词]金银花；改良CTAB法；RAPD ExtractionDNA anditsRAPD fromleavesofLonicera Thunb genomic japonica analysis theextraction DNAfromleavesofLonicera the 【AbstractlObjectives：Grasp genomic japonicaThunb．Compare differencebetweenthc ofbeforeandaftertheRAPD modifiedCTABmethodtoextractthe graph analysis．Methods：Using RAPD ofLonicera DNAand Thunb afterthe genomic analysising．Results：Geneticspectrum japonicachanged Polymerase Chain Reactionused． CTAB Thunb；Modifiedmethod；RAPD 【KeywordsILonicerajaponica DNA又称脱氧核糖核酸，是染色体的主要化学成分，是遗传信息的载体。DNA的半保 留复制是生物进化和传代的重要途径Ill。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链， 在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝【lJ。有研究发现， DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变 化控制DNA的变性和复制。PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依 Chain Reaction)即PCR 赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。聚合酶链式反应(Polymerase 增特定基因或DNA序列的方法，是一种分子生物学技术。PCR反应由变性一退火一延伸三 个基本步骤构成，每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百 万倍。PCR技术已被广泛应用于临床医学、遗传咨询、司法鉴定及考古学、分子生物学等各 个领域。 ChainReaction)基础之上的一种可对整个未知序 RAPD技术是建立在PCR(Polymerase 时发展起来的。将先进的分子生物学技术与传统药用植物的研究结合起来，是药用植物研究现代化 的重要途径【4J‘。RAPD技术是目前中药材鉴定应用较广泛的方法pJ．。以基因组DNA为模板，以 单个人工合成的随机多态核苷酸序列(通常为10个碱基对)为引物，在热稳定的DNA聚合酶 (Taq酶)作用下，进行PCR扩增16J。扩增产物经琼脂糖或聚丙烯酰胺电泳分离、溴化乙锭染色 后，在紫外透视仪上检测多态性。扩增产物的多态性反映了基因组的多态性。RAPD分子标记广 泛应用于作物品种或种子纯度的鉴定，具有简便快速等优点，但也存在特异性条带