近红外荧光探针在生物分析中的应用进展.pdfVIP

近红外荧光探针在生物分析中的应用进展 王雪，邱建备，尹兆益，宋志国 (昆明理工大学材料科学与工程学院，昆明，650093) 摘要：本文介绍了菁染料、罗丹明类、噻嗪类、唾嗪类、BODIPY、酞菁类、稀土离子配合物等近红外 荧光探针在近十年来的发展。按其种类分别讨论了它们的试剂结构，荧光测定及荧光分析方面的应用。 引用文献28篇。 关键词：近红外荧光探针；生物分析 0引言 荧光光谱检测方法由于其灵敏度高、选择性好，在分析化学，特别是生物分析中有较广泛的应用。大多数生 低。目前用于标记或衍生的荧光试剂主要有荧光素类、罗丹明类、邻苯二甲醛(OPA)类等化台物，它们本身具有很 高的荧光量子产率，但最大吸收波长和荧光发射波长多小于600nm。而对生物样品而言，其样品基体和一些杂质在 此区域也会有吸收或荧光，再加上光散射的影响往往会产生较为严重的背景干扰，限制了荧光分析法灵敏度的提高。 1 菁染料 近红外区的菁染料一般都是指五甲川和七甲川1菁染料。另一方面，菁染料光稳定性较差，易发生光氧化漂白。 菁染料的光氧化具有以下特点：(1)在溶液中的光氧化反应符合一级反应动力学过程；(2)菁染料中甲川链结构相同 光稳定性越差。这些对于设计光稳定较好的近红外菁染料具有非常重要的指导意义。 用于DNA分析的近红外菁染料中最重要的就是噻唑橙及嘿唑橙二聚体和单聚体。二聚体叫TOTO系列染料， nnl移 大吸收波长为647nm，在含有重复A．T碱基对的双螺旋DNA存在下，光谱分析表明，最大吸收波长从“7 g孓—√D ／ ＼ I n 光谱区分(Spectral 法，但光谱区分的一些潜在的困难包括某些情况下要使用多重激发光源和多道检测器等，为解决需要多 重光源的问题。荧光能量转移探针可用来作单链(Single dsDNA有很高柔性的荧光花青异二聚物。在这些染料中，噻唑、假吲哚等作受体而噻唑黄作为荧光给予 体，二者通过含季铵基的多次亚甲基链连接起来，此异二聚物对dsDNA有高度的柔性，改变次甲基链的 长度对给予体荧光淬灭有影响并能到达最佳。Soper巧1等在花青染料的分子框架上修饰重原子，不改变 吸收或发射光谱的最大值，但可改变单重态的性质诸如量子产率、荧光寿命等，用卤素惨饰的探针不论 在自由态还是结合态，其荧光寿命相差分别为几十到一百ps，可用单一的激发光源和检测器，用荧光寿命 分辨的办法可将这些探针用于DNA序列分析中。 114 菁染料可通过活性反应基团与抗体或抗原蛋白质结合，形成染料～蛋白质结合物，从而进行检测。 标记的GAHG(Goat 检验法，来自双氧水的过氧化物产生的羟基对荧光有猝灭作用，可用来检测酶的活性‘71。 近红外光谱区的荧光检测比可见光区的更加适合生物组织造影分析，对活体组织进行光学造影的基 础在于光能渗透到组织内部，这种光渗透的深度和光的波长密切相关。采用大于600am的光时，光渗透 组织的深度可达数厘米，因而可以对一些比较大体积的组织进行造影，从而进行疾病诊断。在生物组织 Green，Ⅷ1，多用于临床活体组织的荧光造影。 造影中用的最多、最著名的就是吲哚菁绿ICG(Indoeyanine 近年来更是作为动物中l如刿和人体癌症组织的检测。其它的一些花菁也被用于体内癌症的检测。 八 n 刚晖．．顾：』n蝴叭№N Q二娥：二孵搿眦沸 这类试剂的基本结构如下：113,141 ，罨§ 蒂一毪 ∥毡 115 band