人骨髓间充质干细胞构建组织工程骨与量效关系研究.pdfVIP

中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院 中文摘要 目的： bone stem 骨髓间充质干细胞(humanmesenchyIIlalcells，BMSCs)是组 织工程骨目前最常用的种子细胞，BMSCs构建组织工程骨(tissueengineering bone，T朗)的量效关系是TEB临床应用中的重要问题，但是目前尚未见明确报道。 本实验研究了hBMSCs体外成骨诱导不同时间点的成骨相关基因表达和体外传代 对h酬SCs干细胞表面标志表达、增殖和分化能力的影响，并通过不同浓度hBMSCs 构建TEB的量效关系进行了初步探讨。 方法： l、密度梯度离心法分离hBMSCs，应用流式细胞检测、成骨及成脂诱导分化进行 干细胞鉴定。 2、对h酬SCs进行体外成骨诱导分化，应用RT—PCR法对体外成骨诱导不同时间 点的成骨相关基因表达进行检测。 3、对hBMSCs进行体外传代扩增培养，应用流式细胞技术、MTT法和细胞计数法 PcR法和 检测不同代数hBMSCs的于细胞表面标志和增殖能力；应用Rea卜time 油红O染色检测不同代数hBMsCs的成骨和成脂分化能力。 (HE)和Rea卜timePCR法检测不同浓度hBMSCs在B—TCP支架上的生长和成骨 分化情况。 5、使用相同浓度不同体积hBMSCs接种B—TCP支架构建组TEB并植入裸鼠皮下， 应用组织学检测其体内异位成骨情况。 结果： l、h酬SCs的生物学特性：密度梯度离心、贴壁筛选结合消化控制法分离得到的 外可分化为成骨细胞和脂肪细胞。 3 中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院 2、hBMSCs体外成骨诱导：成骨相关基因在诱导早期部分表达，中期均有表达， 基因表达大部分在14天达高峰，与矿化相关的基因表达在21天达高峰。 3、h跚SCs体外传代培养：P4代以后的hBMSCs的增殖能力、成脂和成脂分化 能力减弱。 在B 不同浓度组的成骨分化水平无明显差异。 TEB，接种体积增加，体内成骨成功率增加。 结论l 密度梯度离心、贴壁筛选结合消化控制法可成功分离h酬SCs。hBMSCs体外 成骨诱导过程中成骨相关基因呈动态表达，其表达时序与成骨细胞生理发育基本 相似；Passage5(P5)代之前的hBMSCs增殖和分化能力较强，适宜临床选用； 骨成功率随hBMSCs的接种数量增加而增加。hBMSCs构建组织工程骨的量效参数 能够为组织工程骨的进一步研究及临床应用提供参考。 关键词骨髓间充质干细胞成骨诱导组织工程构建 4 中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院 Abstract objectives： m曲肌bone InesenchyrI谢stem uSed舔∞ed cells(hBMSCs)haVebeeIl研dely in cells bonetissue dosee腩ctof姐MSCson engineeriIlg．1k bonetis鳓Je is fore船嘶ve and been h鹪not idemified．In engineeringizIlponamt application ollr detIjcttlle rclated inVin．0 gmdy，we osteog砸c ge∞eXpression血Iri】【lg