线粒体活性氧与糖尿病视网膜病变关系及机制与研究.pdfVIP

复里大学溥士磷究生论文线粒体活性氧s耱尿瘸视礴筷嫡变关系占乏帆翱的研究 ● 线粒体活性氧与糖尿病视网膜病变 关系及机制的研究 中文摘要 糖尿病视网膜病变(diabetic ● 加；糖基化终末产物(advanced glycation kinase 酶C(proteinC，PKC)的激活：己糖胺途径(hexosaminepatllway)的增加。虽 然每种假说都有相应的实验依据，但是四种假说都只能解释糖尿病性视网膜病变 superoxide)产生增多，并认为这是其他几条途径的启动因素。我们知道线粒体是 细胞内产生活性氧的关键部位，高血糖通过某些途径诱导线粒体活性氧产生增 多，然后启动了上述四种病理生理过程。因此，有效阻断此途径有望防止糖尿病 性视网膜病变的发生。那么，高血糖时线粒体活性氧是如何增加的?高血糖时线 粒体活性氧产生增加，是否与线粒体抗氧化防御机制减弱有关?作为最主要的线 dismutase， 粒体抗氧化酶一线粒体超氧化物岐化酶fmanganesesuperoxide ● MnSOD)，在高血糖条件下，其表达或活性是否受到了抑制从而导致了活性氧 (reactive oxygen proteins， UCPs)是一类与线粒体活性氧产生关系密切的线粒体膜蛋白。它可以通过催化质 membrane 子通过线粒体内膜渗漏来调节线粒体膜电位(mitochondrialpotential． AV)，继而调节线粒体活性氧的产生。不同的组织表达不同的解藕联蛋白 UCPl．UCP5异构体，作为糖尿病高血糖损害的主要靶位，视网膜血管内皮细胞 及周细胞中分布的是哪种UCPs的异构体?糖尿病高血糖时其表达有何变化? 本研究从分子水平入手，采用共聚焦显微镜、流式细胞仪、免疫组化及 ● RT—PCR等方法研究这些尚未明确的问题，揭示糖尿病视网膜病变的分子机制， 从而探讨有效的预防措施，为糖尿病早期甚至在亚疾病阶段的预防性治疗提供理 论依据。 第一部分高糖对牛视网膜微血管内皮细胞和周细胞线粒体活性氧的影响 目的观察高糖条件下培养的牛视网膜微血管内皮细胞、周细胞线粒体活性氧产 生量的变化，研究导致此种变化的原因及所致影响，探讨糖尿病视网膜病变的发 生机制。 方法①采用选择性培养方法培养牛视网膜微血管内皮细胞、周细胞，通过共聚 ● 复旦太学博：|：研究生论文线粒馋活性氧s糖尿确视趣膜病变关系及帆翻的研究 ● 焦显微镜检测不同葡萄糖浓度下内皮细胞、周细胞线粒体活性氧产生量的变化。 ②采用流式细胞仪检测不同葡萄糖浓度下线粒体膜电位、细胞死亡率的变化。⑨ 免疫细胞化学及免疫荧光方法检测内皮细胞、周细胞表达UCPl—5中何种异构体。 度下的变化。 结果①随着培养基中葡萄糖浓度的增加，内皮细胞、周细胞线粒体活性氧的产 生呈增多趋势。②随着培养基中葡萄糖浓度的增加，内皮细胞线粒体膜电位逐渐 ● 升高，细胞死亡率逐渐增多，而周细胞则无此变化趋势。③经免疫细胞化学及免