温度影响农药抑制植物酶研究.pdfVIP

中国T程热物理学会 传热传质学 第十届年会 论文编号OJ3J13 温度影响农药抑制植物酶的研究 肖建军华泽钊徐斐 (卜海理丁大学制冷与低温技术研究所，¨每，200093 电话：021E-mail：xjjxy@citiz．net) 摘要：为研制探铡农药残留的生物传感器，本文研究了农药乐粜[o．o二甲基S-(N-甲基胺基甲 酰甲基)二硫代磷酸酯1对植物酶的抑制与温度的关系、植物酶反应的最适反应温度．从面粉中提 取植物醇．以农药乐果为抑制剂．采用分光光度法研究了，乐果与面粉酶的抑制反应时间对酶活性 的影响：研究r在同样温度时不同浓度．和相同浓度时不同温度的条件下，农葑对植物醇活性的 抑制情况。研究冠示．抑制反应时间大干5分钟时．酶的活性明显地受到抑制；在4813酶反应的 速度晟快；温度相同时受农药的抑制作用随农药的浓度增大而增强；随着温度的升高，一定浓度 的农药对面粉酶的抑制变强．研究结果说明了研究微型恒温器的必要性． 关键词：农药残留，生物传感器．f酶自口愠度效应，植物酶 L× 产、、 1．引言 有机磷农药溶解性好．易被水解，在环境中可披很快地降解，因而使用普遍。一般 规定在收获前若干天内应禁止对果蔬施药，以防止中毒，但不法农民不按农药使用规范 施用，在果蔬收获前还大量喷施农药．造成消费者中毒。就近几年的检测结果看，国内 最好的地区也有5％的农产品农药残留量超标，严重的地区高达85％“’。因此需要对农 产品进行监测。近年来，国际上正在研制能快速检测农药的生物传感器，但至今仍处于 实验室阶段．未见有实用化产品。1。本文是为研究酶传感器所作的应用基础研究。 酶是一种高度专一、具有很强催化能力的催化剂，在生化检测中得到了广泛应用。 酶法检测农曲残留量可用胆碱酯酶、植物酶等酶，运用植物酶依据的原理是有机磷、氨 基甲酸酯类杀虫荆能抑制植物酶的活性；而植物酶被抑制的程度又可用比色法来测定。 显色反席的原理是”。“： 乙酸．。．萘蟪+水—孽萦酚+乙酸 萘酚+铜蕊B盐—+紫红色羁氮化合物+氯化锌+盐酸 植物酶可以使乙酸．o．萘酯(I．Naphthylacetate)水解为萘酚和乙酸，萘酚与呈色剂固 blueB 蓝B盐(FastSalt)作用形成紫红色的偶氮化合物，从而完成显色反应。当酶被 抑制的程度不周时，紫红色偶氮化合物的产量不同，溶液颜色深浅不同。 酶反应速度与温度有关，且受抑制剂的影响：在选择酶源时，应选择活性高而且其 活性对农药敏感的酶作为生物传感器的酶源，因此本研究测定酶的活性与温度的关系， 以及酶受农药抑制的情况。 丰研j￡得州饵宗冉然科学募叠台重点项B的资I蜥 628 2．材料与设备 2．1材料：面粉为市售普通面粉；农药乐果【o，D二甲基S．(N．甲基胺基甲酰甲基)二硫 代磷酸酯】，上海农药厂生产：乙酸．a．萘酯，上海青浦合成试剂生产：固蓝B盐购于上 海化学试剂公司。 2．2设备：7225分光光度计．上海分析仪器厂：微型振荡器，江苏金坛医疗仪器厂； 离心机，北京医用离心机厂；恒温水浴，上海医用仪表厂。 3．实验 3．1面粉酶制蔷：用蒸馏水作提取液，面粉与水的比例为l：5，搅匀，以150次／min的 速度振荡30分钟。然后以4000r／rain的速度离心一分钟，将上清液过滤即为面粉酶。 3．2基液配备：将100rag乙酸．Ⅱ．萘酯溶于80m]无水乙醇即为基液． 3．3显色液配备：将125mg固蓝B盐溶于80ml蒸馏水即为显色液． 3．4抑制剂制备：以农药乐果为抑制剂。乐果原样为40％乳油．溶剂为苯，首先用苯稀释为 浓度为l％的溶液，然后用蒸馏水稀释以制各不同浓度的乐果标样。试验的乐果浓度分别 为i000ppm、100ppm、10ppm和Ippm。 3．5酶反应速度测定：测定时取乐果溶液4m]，加酶0．087m1，在恒温水浴中进行酶抑制 反应：然后加显色液O．087mi，加基液O．13ml，振荡5秒后在水浴中进行显色反应．取 抑制反应时间为0，5，10，30分钟，取显色反应时间1、2、4、7、10