mRNA差异显示技术及其在猪基因组研究中的应用.pdfVIP

·38 · Animal Husbandry Veterinary Medicine 　2001 　Vol33 　No3 文 献 mRNA 差异显示技术及其在猪基因组 综 述 研究中的应用 潘佩文 , 赵书红 , 刘 　榜 , 李 　奎 , 彭中镇 (华中农业大学畜牧兽医学院动物分子生物学与育种实验室 , 湖北 武汉 　430070) 摘要 : 差异显示是一种快速分离、鉴定不同细胞类型基因表达差异的有效方法 。此技术自建立以来便广泛应用于比较研究中; 本文简要介绍了有 关差异显示的原理及在猪基因组研究中的应用 。 关键词 : 差异显示 ; 猪 ; 基因组 中图分类号 : S8282 　　　文献标识码 : A 　　　文章编号 : (2001) 　　据估计 , 高等生物中大约含有 100 000 个基因 , 但在每一 共 12 种 , 从而将 mRNA 分成 12 等分 , 每一种引物只能启始某 个细胞中只有一小部分约 15 %在表达 。正是这种基因表达水 一部分 mRNA 的反转录 。在随后的 PCR 中 , 利用此锚定引物 平及模式的变化控制着生物体 的整个生命过程及其代谢变 与 5′端 10 个碱基的随机引物组合进行扩增 。5′端引物能随机 化[ 1] 。因此 , 比较研究差异表达基因对揭示生命活动的规律有 与 cDNA 的任一位置结合 , 从而得到大小不同的扩增产物 。理 着重要意义 。作为一种鉴定和分析真核细胞 mRNA 水平上基因 论上 , 通过 12 种 3′端锚定引物与 20 种 5′端随机引物的组合 , ( ) ( ) 表达差异的有效方法 , mRNA 差异显示技术 DDRTPCR , DD 即可检测所有的mRNA 。扩增时 dNTP 中一种 常用 dATP 以 从 1992 年由Liang 及 Pardee 建立 以来 , 不断地得到发展与完 放射性同位素标记 , 以使产物在测序凝胶上电泳 , 通过放射 自 善 , 并显示了广阔的应用前景 。本文对其原理 、技术和在猪基 显影 , 能观察到 mRNA 在不同类型的细胞间的差异表达 。差异 因组研究中的应用作一综述 。 带从胶上被切下回收后 , 以相同引物再次扩增 。产物用作探针 进行 Northern 杂交以鉴定差异表达的 mRNA , 之后克隆测序 , 1 　基本原理与方法 还可在基因库中进行扫描 。 mRNA 差异显示技术是从 2 种或多种被比较的细胞中提取 2 　有关技术的改进 总 RNA 或 mRNA , 反转录形成 cDNA 。再利用 PCR 扩增和测序 胶电泳技术 , 快速高效地分析细胞中所有的mRNA , 从中寻找 自从差异显示技术建立以来 , 许多研究者已对它作了诸多 到差异表达的基因片段 , 再进行鉴定 。其简单原理如图 1 所 的优化及改进 , 如在模板 、引物的设计 、差异带的检测 、电泳 示 。 及扩增产物的纯化和克隆等方面[2～4 ] 。模板可用 mRNA 或总