旋毛虫类lin-28基因研究.pdfVIP

华东地区2006年动物学学术研讨会 旋毛虫类lin．28基因的研究4 杨玉荣·简薇 (厦门大学生命科学学院寄生动物研究室361005) 摘要：根据CeJegans中砌一28基因序列设计引物。对国内旋毛虫五种不同来源的地理 株进行PCR扩增，结果发现在旋毛虫中有与Celegans1in-28同源性很高的序列。同时 根据Celegans砌一28基因的保守性对测序结果进行序列比对和建立了系统发生树。为 进一步研究旋毛虫类lin-28基因奠定了基础。 关键词：旋毛虫；1in-28基因 旋毛虫是一种成虫和幼虫分别寄生在同一宿主小肠和肌肉细胞内的线虫，无外界的自由生活 的成虫微小，呈线状，寄生于宿主的十二指肠和空肠上段，胎生，每条雌虫一生可产幼虫2000条 人、猪、鼠类、犬等150多种动物，其成虫寄生于宿主的肠内，幼虫可在宿主的横纹肌肉内寄生。 人发生旋毛虫病是因食用了生的或未煮熟的旋毛虫病肉。其幼虫移行过程中的机械性损伤，代谢 产物的毒性作用，虫体各种抗原成分的超敏反应，均可造成人体全身血管、肌肉组织和重要脏器 的损害，．引起肺炎、支气管炎、胸膜炎、旋毛虫毒性心肌炎、心力衰竭，心律失常、肝肾功能不 全、中枢神经系统损害、昏迷和抽搐等症状。自70年代末以来，英国曾3次爆发本病，我国也发 生了几十次人感染旋毛虫的事故。该病的流行不但对畜牧业、食品业及外贸出口造成重大经济损 失，而且还对人类健康构成威胁。由于旋毛虫宿主范围极广、传播途径复杂，所以给旋毛虫病的 防制带来困难。 1in-28基因是Caenorhabditis elegans中控制胚胎后发育事件时间性的基因，又称为异时性基因。 在celegans中，胚胎后发育事件的时序性是特异性调控的。调控因子是由一系列异时性基因编码 的，它们在各种组织的一系列细胞连续性发育过程中起作用。在Celegans每个幼虫时期，这些调 控因子的变化选择性地决定了细胞的命运。异时性基因在特定时期的激活或者抑制，是发育时序 性调控中的重要机制。如果一个异时性基因发生突变，幼虫的发育过程或者提前、或者推后。 于转录后调控。／／n-28的阶段特异性表达是由两个遗传通路所控制调节的，其中小分子RNA，[IP22nt 的／／n-4 RNA负调控砌．船的表达，异时性基因砌．J4的正调控砌．船的表达。／／n-28突变是隐性的， 是“提前”突变。砌．船突变与隐性的砌．J4相似，不过／／n-28对发育的影响更强烈。有些事件甚至 逐渐减低，因此我们推钡gLIN-28和L1期幼虫的发育有关系。在L2期它的表达水平的降低可能是L2 44奉课题受困家自然科学基金(No．3047088 1)和福建省自然科学基金重点项目(No．C0320001)资助，·通讯作者 email：yryang@,jingxian．xmtl．edu．cn 202 华东地区2006年动物学学术研讨会 期以及之后各期幼虫的发育所必须的．由于旋毛虫等寄生性线虫在体内的侵袭常常都是在L2期幼 虫阶段，因此LIN-28很有可能成为一个阻断第二期幼虫发育和侵袭的重要靶目标。本文报告我们 序列的比较。 1材料和方法 1．1旋毛虫虫株来源 Th Tz国际标准株由吉林大学农学部人兽共患病研究所刘明远教授惠赠，湖北(船)株、东北 (明)株由上海寄生虫病研究所(CDc)惠赠，河南(删)株由河南大学王中全教授惠赠。实验室 常规小鼠感染保虫。 1．2旋毛虫肌幼虫的收集 将感染30天以上的小白鼠剖杀，取其骨骼肌剪碎，将碎肉放入烧杯，加入消化液(每100mi 水中29 先用60目滤筛除渣，然后用自来水反复沉淀洗涤数次，无油斑后，用120目滤筛除去细小沉渣， 再用生理盐水沉淀漂洗数次，将液体转移到培养皿在解剖镜下用10ul枪吸虫体，转移到干净盛有 生理盐水的培养皿中，如此反复，最后将液体移入1．5ml离心管中用枪抽打几次，离心，吸去上 清液，得到干净的肌幼虫。 1-3 DNA的提取 对大量收集的5种虫株的肌幼虫，用蒸馏水清洗3-．一5遍，再用1×PBS清洗3～5遍后，加 入抽提缓冲液NTE和蛋白酶K，50℃水浴消化16～18h．具体操作步骤见分子克隆实验指南》 第3版，1％琼脂糖电泳检查