单分子(单颗粒)探测新方法研究.pdfVIP

第37卷 分析化学(FENXIHUAXUE) 增刊 2009年lO月 ChineseJournal C0《幻 ofAnalyticalChemistry 单分子(单颗粒)探测新方法研究 仇欣 董朝青 黄香宜 谢超 何化 王康林 任吉存+ (上海交通大学化学化工学院，上海200240) 随着生命科学的发展人们希望在单分子水平上了解生物分子之间的相互作用以及生命的过程。传 统的检测方法只能得到系综的平均结果，单个分子的信息隐含于总体平均值内。但是很多情况下，尤 其在活的生物体内，生物分子都处在一个动态的系统中，用平均统计测量法很难定量测定单个目标分 MoleculeDetection，SMD)可以有效克服这些困难。对分 子的动力学行为。单分子检测技术(Single 析化学家而言，单分子检测已经达到分子探测的极限，也是人们长期追求的目标。近八年来，我们课 题组一直从事单分子和单颗粒探测新方法研究。我们基于激光技术，提出了几种单分子和单颗粒探测 新方法。这些方法主要包括共振散射相关光谱，单个金(银)纳米粒子计数方法以及消失波散射成像 方法。基于单分子和单颗粒探测技术，我们发展了高灵敏的均相免疫分析新方法，成功地用于人血清 中肿瘤标志物的检测。基于核酸杂交技术，发展了均相检测DNA和MicroRNA的检测新方法，检出 限在lfmol／L水平。同时我们将单分子和单颗粒方法用于荧光量子点和金(银)纳米粒子在溶液中行 为的表征以及纳米粒子与生物分子连接物的表征。 1荧光相关光谱 Corrdation 荧光相关光谱(Fluor躐cnce 是通过测定微区内(通常小于l×10-”L)溶液中发光粒子因布朗运动或化学反应而产生的荧光涨落 现象(荧光的明暗变化)，对荧光强度波动随时间变化的函数(相关函数)进行分析，从而获得粒子的 浓度、荧光强度、扩散系数(动力学半径)等相关信息的一种新的分析方法。与传统的方法相比，荧 光相关光谱能在单分子水平上研究溶液中分子的化学及生化反应动力学、生物分子相互作用、生物分 子的结构与功能信息，荧光量子点(荧光纳米晶体)的物理与化学特性。基于激光共焦构型，构建了 dots)溶液中行为，光学特 荧光自相关光谱和荧光互相关光谱系统。将系统用于荧光量子点(quantum 性以及量子点与生物分子的相互作用研究。基于荧光相关光谱技术，我们发展了均相DNA杂交检测 和均相免疫分析新方法l卜七J。 2共振散射相关光谱 我们在荧光相关光谱研究中意外地观察到在高聚焦激光束下，溶液中金纳米粒子(如17rim)和 银纳米粒子(15run)由于布朗运动和等离子体共振散射效应，产生散射光强度的波动。通过对散射 光强度波动随时间变化的函数(相关函数)进行分析，从而获得金(银)纳米粒子的浓度、单颗粒散 射强度、扩散系数(动力学半径)等相关信息。纳米粒子散射光强度与入射波长相关，我们称这种新 方法为共振散射相关光谱(1bsonance Correlation LightScattering 光谱的理论，我们构建了共振散射相关光谱理论模型。建立了金(银)纳米粒子的浓度、单颗粒散射 强度和扩散系数测定方法。基于遗传算法，提出了金(银)纳米粒子分布表征新方法。我们将共振散 射相关光谱用于DNA均相杂交分析，金(银)纳米粒子与生物分子的相互作用研究以及它们与生物 分子连接物的表翟¨。 +E-mail：jicuarcn@sjta．。dlI．cn 分析化学 第37卷 3单个金(银)纳米粒子计数器 在共振散射相关光谱研究中，我们发现在高聚焦激光束下，溶液中金(银)纳米粒子由于布朗运 动和等离子体共振散射效应，产生强的光子爆发现象。光子的爆发数与金(银)纳米粒子的浓度呈现