大肠杆菌K88ac菌毛蛋白亚基因的克隆、表达和免疫原性研究.pdfVIP

中国畜牧兽医掌会动物传染病学分会第十二次学术研讨会 2．2间接EUSA与mExX试剂盒检测结果的比较 间接ELISA方法结果根据阴性平均值确定，P他2．1时判定为阳性。采用间接ELISA 法和DD()(抗体检测试剂盒分别对常州、六合、海南等不同地区的猪血清进行检测，样品 共1％份。结果显示：间接EuSA法与IDExX试剂盒检测的符合率为83．8％：假阴性率为 8．8％，假阳性率为1．5％(表4)． 囊4两种不同方法检测样品结果的比较 !些疃苎￡2删!塑窒!璺曼塑堑塑堡型!!苎!丛垫盟!堡婴!堡堂塑! 登曼墨堡塑gi!堕翌!里!塑 检测方法Melllod 常州 四川 海南 六合 + 一 + 一 + 士 一 + 样品数N啪bcr ofsalTlp|cs 30’’ 26 18 12 4 4 12 一 cl】hod 枷i慧裟0意odIndirectELlSAm 星墨型篓錾墨!!!!!!!!!!!!．竺竺 +‘表示阳性样品；一I表示阴性样品‘士l表示可疑样品。+，—锄d士Rpre辩ntpositivenega￡ivc锄dsuspect ∞plc。m印硎Vely． 3讨论 猪气喘病是一种接触性、慢性呼吸道传染病。主要以咳嗽、喘气、生长发育迟缓及饲料 转化率低等为特征，具有发病率高，死亡率低的特点，同一猪群的发病率可达100坩‘”。另 据报道，该病可使猪的饲料转化率降低10％，生长速度降低12％v15％．育肥期延长1个月， 与其它病原如胸膜肺炎放线菌、猪繁殖与呼吸综合征以及肺炎巴氏杆菌等混合感染时，情况 更为严重【7s】。该病一旦爆发就难以控制，会给养殖业造成巨大的经济损失。所以建立一种 灵敏、稳定的检测方法对监控本病及流行病学调查具有重要的意义。目前，有关猪肺叶支原 体的检测，国内外已建立了多种血清学检测方法。如免疫琼扩和间接血凝等。免疫琼扩和间 接血凝试验虽操作简单，但却存在着灵敏度不高等问题。本研究初步建立了ELIsA检测方 法，尚有一些不健全和相应克服的问题：①在抗原处理过程中，Mh口各批次的抗原生长状 态有很大差异，所以使用前要注意选择。抗原处理参考报道的方法卜…，略加改进，取得了 一定效果．其中关键是抗原洗涤必须要干净，因Mhp培养中需要血清，而血清中的杂质较 多，因此本试验采用先低速离心去除大部分血清中的杂质。再高速离心获得菌体。②ELISA 反应中．阳性血清和阴性血清的筛选至关重要，它是决定检测结果能否可信的重要证据之一。 经过研究探索，将4％PEG6000加入样品稀释液中，可有效提高阳性值，而阴性值变化不大。 本研究建立的间接EuSA法与DExx试剂盒符台率较高，具有较好的特异性、灵敏性和较 高的重复性，但仍需进一步改进。 参考文献略 大肠杆菌k踮ac菌毛蛋白亚基因的克隆、表达及 免疫原性研究26 孛田军．侯喜林。，扑范泽 (黑龙江八一农生大学动物科技学院黑龙江大庆163319) 拓基叠项百：黑龙江省教育厅资助 作者简夼：李雷军‘1979．)．男．黑龙江明水县人。硬士．主要从事传染病的诊断和防治工作． 。通讯作者：E．m蚰：出Yh掣@)璺b蝗篮m。衄 495 猪的传染病 摘要l利用PcR技术，从Eco疗c83902中扩增出不舍信号肤序列的K雌ac茸毛蛋白亚基基因片段．将其克 cDff)【L1．Bluc中。经旷rG谤导后，重 隆到表逸栽