猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州流行株GP5基因的RLFP分析.pdfVIP

第三届南京农业大学畜牧兽医学术年会论文集 ·27· 猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州流行株 GP5基因的RLFP分析 汪德生1，杨鹤峰2，史开志1，周碧君1，文明¨ (1．贵州大学动物科学学院，贵州贵阳550025；2．贵州省六盘水市兽医防疫站，贵州六盘水553000) 摘要：为对贵州省某养猪场猪繁殖与呼吸综合征(PRRs)疑似病例进行确诊及分析其病原分子变异情况，采集该养猪场死亡猪病料样本进行猪 基因呈l-3-3 可导致一些酶切位点的丧失或显现。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征；RT．PER检测；RLFP分析 and 猪繁殖与呼吸综合征(porcinereproductive 1材料与方法 respiratorysyndrome，PRRS)是猪繁殖与呼吸综合征 1．1临床发病情况调查 病毒(PSSRV)引起猪的一种急性传染病，临床表 现为妊娠母猪发生流产、死胎、木乃伊等繁殖障碍， 观察病猪的临床症状，统计仔猪、成年猪的死亡 仔猪群以高热为主要特征，伴发咳嗽、喘气等呼吸障 率及母猪流产率。现场剖检死亡猪，记录不同脏器的 碍；发病猪的肢体末端尤其是耳朵呈现广泛微循环障 大体病变；并采集3头死猪的肺、淋巴结等病料 碍而发绀，故称“猪蓝耳病”【lJ。PRRSV主要侵害猪样本。 的免疫系统引起免疫抑制，易发生变异和核酸重组， 1．2血清抗体测定 使猪群形成病毒持续性感染，对养猪业构成了极大的 采集该养猪场发病猪的血清样本8份，用武汉科 威胁口j。PRRS在我国流行初期，通常引起母猪发生前动物生物制品有限责任公司生产的猪繁殖与呼吸综 繁殖障碍、哺乳仔猪呈现呼吸道症状和断奶仔猪生长 发育不良，死亡率较低【3j。但自2006年5月以来， 我国大部分地区发生了由PRRSV变异毒株引起的小病毒病乳胶凝集试验试剂盒(生产批号070301) PRRS，死亡率大为提高HJ。2007年9月，贵州省某检测感染猪的相应血清抗体，具体操作步骤按试剂盒 养猪场出现仔猪高死亡及母猪流产疫情，在疫病流行 说明书进行。 1．3 PRRS病原核酸的RT-PCR检测 期间51日龄断奶仔猪死亡率为96．42％，妊娠母猪 流产率为10．86％，成年母猪也可见发病死亡，初步1．3．1病料样本RNA提取 疑为PRRS。为准确诊断该猪场的PRRS疑似病例，取死亡猪肺、淋巴结等病料样本，按1：5比例 添加0．01 了解贵州PRRSV流行株的变异情况，本试验采集发 mol／L的PBS(pH7．4)研磨成组织匀浆 000 病死亡猪病料样本进行了PRRS病原核酸检测，并探液，反复冻融3次，4℃8 r／rain离心10min， 索了贵州流行株与弱毒疫苗株的分子差异。 取上清液以Trizol法提取RNA。 测时，并未发现任何异常，对检测出有PRRSV的公 进一步试验显示，使用高致病毒株进行动物回归 猪进行隔离和连续观察，并未有任何发病迹象，所有 试验所得结果为所有实验动物均有典型症状，而携带 种公猪免疫的PRRSV疫苗为传统的弱毒经典毒株，我们分离病毒株的猪只时至今日外观生理指标结果都 其他疫苗的免疫均遵照常规免疫程序，分离到的病毒 正常，造成这种情况有可能是毒株其他基因发生变 的特点明显与疫苗株不符，相反与高致病毒株的特点 化，或者带毒猪只呈现个体差异，进一步的研究将在 非常吻合，并且采血时间远超过弱毒可以检测到的时 此两方面开展。 间，这说明所分离到的病毒可能为一株高致病毒株。 此外，