猪输血传播病毒(TTV)与猪圆环病毒(PCV)混合感染的检测及TTV遗传变异分析.pdfVIP

病毒病一猪其他病毒病 检测及TTV遗传变异分析 刘建波郭龙军危艳武黄立平吴洪丽刘长明‘ (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室哈尔滨150001) 起相关疾病可能存在一定依存度；TTvl和TTv2基因型变异幅度较大，具有遗传变异多样性特点。 关键词 TTV；PCV；混合感染；遗传变异分析 输血传播病毒(Trans允sion仃{msmitted 输血后发生急性感染的非甲．戊型肝炎病人血清中发现[1】。中国军事医学科学于1998年证实我国人群 中存在TTVl2J。该病毒在人群总的感染率较高，TTV是从肝炎患者中分离得到的【I】，怀疑与肝炎有 关。对不同人群TTV感染的流行病学调查，发现人群中的TTV阳性率达10％以上ljJ。随着研究的深 入，在灵长类14J、家养动物垆J以及老鼠的体内也相继发现TTV的存在，并以胎盘感染或初乳吸允途 径垂直传播【6】。TTV基因组为2．8kb，分为编码[x．和非编码区，非编码区核苷酸序列比较保守，编码 码区中的内含子的序列分隔成两段。根据TTv的基冈序列，将其分为2个摹因掣，即TTVl和TTV2， 每个基凶型中又细分若十基因亚型。 阳性(55．6％)，两者共阳性为38份(23．5％)17J。我围娄高明等(2009)对我国江西、广东、湖南、 37．6％和82．6％【91。 circle 猪圆环病毒(Porcine 猪多系统衰竭综合征(PMWS)，该病于1997年在加拿大首次证实，美闺、法国、日本、韩国等相 肾病综合征，渗H{性皮炎，先大性震颤等疾病也证实与PCV2感染有关。为研究TTV与PCV2的关系， 因组进行了序列分析，阐明我国猪群中TTV遗传变异，为研究其致病性及遗传演化奠定基础。 作者简介：刘建波(1985．)，男，在读硕士生，主要从事猪病毒病研究。 ’通讯作者：E．mail：lcm@h、，ri．ac．cn 454 第四次猪病学术研讨会会议论文集 1材料和方法 1．1病料来源 本实验室收集了从2004～2009年黑龙江、吉林、北京、辽宁、湖南等14个省共280份送检发病 猪样品(表1)。 表l临床送检病料来源 1．2试剂 PremixEx Start TaqrMHot 连)有限公司；ToplO感受态购自天根公司：质粒提取试剂盒购自AXYGEN牛物技术有限公司； 酸均为国产分析纯。 1．3组织样品处理及病毒DNA提取 取组织样品称量、研磨，制成匀浆后反复冻融3次，取上清液200肛l加入2．5肛l蛋白酶K，混匀后 37℃水浴2 r／min离心5 h，然后加入200山饱和酚，涡旋15s，12000min，吸取上清180Hl，加入200pl 酚：氯仿：异戊醇(25：24；1)后涡旋15s，将100¨l上清转入含有lO肛l醋酸钠(3mol几，pH5．2) r／TIlin离心20 和250山的无水乙醇，一20℃静置15IIlin后12000IIlin，然后用75％乙醇洗涤。干燥后用20山 无菌水溶解DNA，置一20℃保存。 1．4 TTVl和TTV2、PCVl和PCVr2的PCR检测 6．0软 GCCATTCGGAACTGCACTTACT．3’)和TTV2的引物(TTV2．F 有限公司合成。PCR扩增TTVl和TTv2的反应条件为：94℃5min；【94℃30s，55℃30s，72℃ 30s1×35个循环，72℃延伸10 应条件为94℃5min；『94℃30s，55℃30s，72℃45s1×35个循环，72℃延伸10Inin。PCR产物用 1．5％的琼脂糖电泳进行鉴定。 1．5 TTVl和TTV2全基因组扩增 6．O软 II