Feridex标记BMSCs经尾静脉注射移植治疗MCAO大鼠及MRI示踪实验与研究.pdf

中文摘要 Fefidex标记BMSCs经尾静脉注射移植治疗MCAO大鼠及MRI示踪的实验研究 中文摘要 脑血管病已经成为人类致死致残最主要的原因之一，其发病率有逐年上升的 趋势，其中以缺血性脑卒中最常见。神经干细胞的发现和分离成功打破了神经组 织损伤不能再生的传统观念。神经干细胞具有自我更新和多向分化能力，。可在特 定条件下增殖参与神经再生和组织修复，向神经元和胶质细胞分化，在体内受局 部细胞因子和环境因素的影响，向病变区域缺失的细胞方向分化，并与宿主有良 好的组织融合性，向病变区域归巢并参与神经网络形成，恢复神经组织结构，这 些生物学特性使干细胞移植成为脑梗死治疗的最前沿方案之一。同时利用基因工 程技术修饰干细胞，使神经元保护因子或蛋白在缺血边缘区表达增高，阻止受损 marrow 神经元的坏死或凋亡，维持原有神经元的生理功能。骨髓基质细胞(bone stromal cells，BMSCs)来源于中胚层发育的早期间质干细胞，属于多潜能性干细胞， 存在于骨髓腔内，在一定条件下可被诱导分化形成神经干细胞，进一步形成神经 元、胶质细胞。BMSCs作为供体细胞，具有胚胎干细胞和神经干细胞的很多特点； 在临床上更容易从人体内获得骨髓细胞，损害轻微；自体移植也克服了使用胎儿 组织所带来的伦理方面的问题。 目前国内外相关研究大多将骨髓基质细胞直接移植到脑缺血区域，获得了令 人振奋的治疗效果。通过立体定向或者开颅直接注射入损伤部位或者直接注射入 脑室脑池，能将BMSCs直接送达受损部位，提高移植物抵达靶点的数量。因开创 性手术对脑组织产生一定的损伤；不便多次多靶点注射；同时也存在无菌性蛛网 膜炎和蛛网膜下腔粘连的危险。本研究选择经尾静脉注入骨髓基质细胞，简便、 安全、快捷，一次可以输入较多数量的BMSCs，进入脑内的BMSCs分布在缺血坏 死灶周边区。本研究主要解决的问题是BMSCs经尾静脉注射移植后，如何在活体 内检测移植细胞的定向归巢和细胞增殖。本研究方法是使用活体示踪剂超顺磁性 氧化铁颗粒Feridex(商品名：菲立磁)在磁共振下体内外观察被标记的BMSCs， 监测BMSCs在脑内存活、增殖和向神经分化，分析对MCAO大鼠的神经功能评分 改变的影响，评价经静脉注射移植BMSCs以及Feridex标记BMSCs的可行性。 中文摘要 Fefidex标记BMSCs经尾静脉注射移植治疗MCAO大鼠及MRI示踪的实验研究 第一部分大鼠骨髓基质细胞的体外培养实验研究 marrowstromal 目的：探索大鼠骨髓基质细胞(bone cells，BMSCs)的体外培 养方法。方法：体外分离60-90 g 养大鼠BMSCs，相差显微镜观察原代及不同传代细胞的生长特性及形态变化，并 进行细胞表型鉴定和巢蛋白(nestin)、神经元特异性核蛋白(Neuronal specific Acidic Protein， Fibrillary neucleoprotein，NeuN)、胶质原纤维酸性蛋白(Glial GF)免疫细胞化学鉴定。结果：培养的BMSCs传代12／J、时后贴壁率高达95％， 胞率为28．7％，NeuN阳性细胞率为14．5％。结论：传3代的细胞可作为理想细胞移 植治疗的细胞来源。 【关键词】SD大鼠；骨髓基质细胞；细胞培养 第二部分Feridex标记骨髓基质细胞体外实验研究 目的：应用超顺磁性氧化铁Feridex和阳离子转染试剂多聚赖氨酸(PLL)复 踪Feridex标记BMSCs