EPO抑制人视网膜色素上皮细胞氧化损伤线粒体机制探讨.pdf

9 Y09211 EPO抑制人视网膜色素上皮细胞氧化损伤线粒体机制的探讨 捅 璺 (retinal pigment 机制。方法体外培养的人RPE细胞随机分为正常组、氧化损伤组及EPO处理组； 1j de； 氧化损伤组中分别加入200和400、600、800mol／L过氧化氢(Hydrogenperoxi H。啦)培养24h，建立氧化损伤模型；EPO处理组则在细胞氧化损伤同时加入 疫组织化学方法检测凋亡诱导因子(apoptosis—inducingfactor；AIF)和细胞色素 c： C(eytoehromeCytC)在细胞内表达及分布情况，免疫印迹法检测细胞浆中CytC 及胞核内A[F蛋白表达的变化。结果(1)吉姆萨染色发现，氧化损伤组随H20。 浓度增加逐渐出现凋亡小体，凋亡细胞数呈剂量依赖性升高；与H。啦损伤组相比， EPO治疗组细胞完整性增强，凋亡细胞数减少。(2)免疫组织化学显示：正常人RPE 细胞CytC表达于线粒体中，表现为胞浆颗粒状淡褐染。随H20。浓度增加，阳性细胞 umol几 因CytC释入胞浆而表现为胞浆褐染带增宽，平均光密度值增高：其中600 H20。处理组阳性表达达到高峰，同一浓度EPO处理组与氧化损伤组相比较，平均光密 淡黄褐色，随H：也浓度增高，阳性表达逐渐增强，平均光密度值增高，表现为细胞 胞浆着色加深，且向胞核转位，其在各组中表达趋势同CytC。(3)免疫蛋白印迹法 显示：正常人RPE细胞胞浆中有cytC蛋白弱表达，而胞核中未见AIF蛋白表达，随 着H。如浓度的升高，CytC及AIF蛋白表达增强，与正常对照组相比，各亚组中CytC 及AlP蛋白水平明显增高，差别有统计学意义(P0．01o而EPO处理组。CytC及AIF 诱导的人RPE凋亡。 硕士研究生黄琰霞(眼科学) 指导教师牛膺筠教授 关键词：视网膜；色素上皮细胞：促红细胞生成素；过氧化氢；线粒体 on Mitochondrialmechanismsofthe effectofEPO inhibitory Hydrogenperoxide·induced humanretinal cell pigmentepithefiumapoptosis Abstract theeffectof Cand fhctorinthe explore cytochromeapoptosis-inducingsignal [Objective]To cell of on ofhumanretinal induced by Pathwayapoptosisoxidative画ury pigmentepithelial hydrogen humanretinal