拮抗细菌对烟草花叶病毒(TMV)的抑制作用的研究.pdfVIP

6. 拮抗细菌对烟草花叶病毒（TMV ）的抑制作用研究 申莉莉 王凤龙 钱玉梅 陈德鑫 吴惠惠 何京美 （中国烟草总公司青州烟草研究所） 摘要：从发生 TMV 的烟田耕作层土样中分离到对TMV 有拮抗作用的菌株 33、88 。半叶法生测试验表明， 菌株 33、88 的发酵培养液对TMV 的体外抑制作用分别为98.28%、92.81%，涂抹菌液 6h 后接种，仍有 78.6%、 55.81%的预防作用。硫酸铵沉淀无菌发酵液、PBS 透析获得拮抗蛋白，对 TMV 的体外抑制作用分别为 85.38%、87.47%，并且在 274.00nm 处有明显的蛋白吸收峰，为典型的蛋白质吸收光谱。此外，通过叶圆 片法和透析法生测表明：抗病毒蛋白与 TMV 粒子结合作用为不可逆，有抑制 TMV 在烟株体内复制的作用。 关键词：抗病毒蛋白 生物防治 烟草花叶病毒 The study of resistance of antagonistic bacteria to TMV Shen Lili Wang Fenglong Qian Yumei Chen Dexin Wu Huihui He Jingmei Tobacco research institute of CAAS, Qingdao 266101 Abstract ： This article researched the antagonistic bacteria isolated from the soil of tobacco field. It was showed that the zymosis fluid had better passivation, the control were 98.28%、92.81% respectively, and good prevention, the control were 78.6% 、 55.81% respectively. The antagonistic protein obtained by vitriolin-ammonium deposition had the control of 85.38% 、87.47% to TMV, and it had absorb apex in 274vnm. The study also showed that the link of between antagonistic protein and TMV was un-reversible, and could restrain the copy of TMV in tobacco. Key words: Protein resistance to TMV Biological control TMV 病毒病是作物上的重要病害，因该病发生引起重大损失的情况时有发生，仅我国烟草由 病毒病发生引起的损失每年在 5亿元左右[1]。由于植物病毒的绝对寄生性，其生命周期过程 需要寄主细胞能量、酶系统的参与，病毒病的防治是世界性的难题。 微生物是自然界中一类丰富的资源，微生物之间的拮抗作用广泛存存在，是生物农药 研制的依据之一。从中筛选生防菌株，获得抗病毒蛋白和抗病毒基因，明确作用机制，研制 微生物农药；把微生物源抗病毒基因转入植株，获得抗性品种，是有效策略。 1 材料与方法 1.1 试验材料 从烟田耕作层（5cm~15cm）土样，分离到对 TMV 有拮抗作用的菌株 by33、by88。供试 烟草品种为三生-NN 烟（Nicotiana tabacum var. Samsum NN）、NC89。 1.2 无菌发酵液、蛋白粗提液的制备[2] 35 挑取纯化菌落，在 50ml/250ml液体培养基中，28℃、120r/min 振荡培养 2d ，8000r/min 离心 20分钟，细菌过滤器（0.25цm）去菌体，得无菌滤液。取 100ml无菌发酵液在冰水浴 中，缓慢加入 80%饱和度硫酸铵 56.1g，缓慢搅拌 10~30min，4℃静置过夜，8000r/min、4℃ 离心 20min，沉淀用 2 倍体积的 PBS 缓冲液溶解，上清和沉淀分别置于透析袋中（MW： 8000-14400