四川山地乌骨鸡IL-1β真核表达质粒构建与对IBV+DNA疫苗免疫佐剂效应研究.pdfVIP

四川有畜牧善医学会2007年学术年会 四川山地乌骨鸡IL一1 13真核表达质粒构建 及对IBVDNA疫苗免疫佐剂效应研究 徐永莉’王红宁。黄勇1张毅1余协中1唐梦君1鲜凌谨1向青1 封浪1叶满玉1刘蕊娜1 1．四川农业大学动物科技学院，雅安四川625014 2．四川大学“985工程”西南资源环境与灾害防治科技创新平台，四川大学生命科学学院， 四川大学动物疾病防控生物工程研究中心，成都，610064 T淋巴细胞发现，联合佐荆组与单独IBV 现IBV 但低于灭活苗保护率(100％)。结果表明：IBV DNA组主要免疫后期发挥作用，pDNAII．．,-113免疫早期发挥重要作 用，二者联合使实验鸡体在整个免疫期较长时间内发挥较高免疫水平，pDNAILIB可显著增强DNA疫苗免疫作用。 关键词：山地鸟骨坞 白细胞介素18真核表达质粒IBVDNA疫苗 Infectious 禽传染性支气管炎(Avian 鸡的一种急性、高度接触性的传染病，其特征为病鸡出现呼吸道症状、产蛋数量和品质下降以及肾脏 病变等。目前，该病呈世界性分布，发生于所有养鸡的国家和地区，是严重危害世界养禽业的重大传 染病之一【1捌，IBV血清型很多[3-61，并且新的血清型和变异株不断出现，目前30多种。疫苗是控制病 毒性传染病的重要手段，新型疫苗只保留了与保护性抗原相关的成分，去除了充当佐剂的成分，经常 导致免疫失败，所以急需开发安全新型的免疫佐剂口l。细胞因子能提高抗原的免疫原性，影响免疫的 程度和质量，某些细胞因子就是很强的疫苗佐剂。一些研究表明几一l可能是细胞因子网络功能形 成的中心，也可作为免疫佐剂明显增强疫苗的保护作用【8】。Hayari (1998)等利用LPS刺激liD．1 1细胞，构建cDNA文库，成功地克隆了鸡的ChickenlL一1B(ChlL 一1B)cDNA，对所得到的克隆进行功能表达。ChIL一1BcDNA最初的翻译产物含267个氨基酸， 与人]I,-1 B的氨基酸同源性为25％tlol。本研究克隆四川山地乌骨鸡白介素．IB，插入真核表达载体 pcDNA3．1(+)，构建真核表达质粒研制出分子佐剂pDNAB_,-1p，评价对IBV的免疫增强作用，在 国内外还未见报道，具有重要的理论意义和实用价值。 1材料和方法 基金项目：国家“863”计划项目(2003AA241120) ’徐永莉，(1976-)．女，山西太原人．在读硕士研究生，主要从事畜禽传染病的研究。 。通讯作者：王红宁。教授，博士生导师．主要从事动物预防医学与生物工程研究。Email telephone：028 、 四川省富牧善医学会2007年学术年会 1．1材料 I．I．1试验动物：2周龄非免疫SPF山地乌骨鸡，购自四川省雅安市石棉县畜牧局；动物试验 鸡为非免疫鸡胚，自行孵化。 1．1．2化学试剂：ConA购自南京生兴生物公司；肝素、小牛血清、淋巴细胞分离液等购自成都 博瑞克生物技术有限公司。 ， DNA 1．13分子生物学试剂：限制性内切酶BamHI和EcoRI、T4 Ligase、ReverseTranscriptase Marker XL(AMY)反转录酶、RNasin、DNADL2000、Tap 连宝生物工程有限公司；琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒购自北京天为时代有限公司；组织／细胞总RNA 提取试剂盒购自上海华舜生物有限公司等。 SouthernBiotech公司o 1．1．6 IBV DNA疫苗：本实验室构建的IBVS1、M、N蛋白基因真核表达质粒。 1．1．7攻毒保护实验所用毒株：由本实验室分离、鉴定和保存的IBVSIBK强毒株。 1．2方法