凋亡抑制基因Bcl-2表达与支气管哮喘关系的的研究.pdfVIP

中文摘要 凋亡抑制基因Bel．2表达与支气管哮喘关系的研究 摘 要 目的：支气管哮喘的发病机制非常复杂，涉及到遗传、 环境、行为、心理、机体免疫等诸多方面，虽然世界各国对 支气管哮喘的发病及防治作了大量的研究，但其发病机制至 今尚未完全阐明。目前认为细胞凋亡与支气管哮喘发病相 关。Bcl．2基因足人们近年来广泛重视并研究的一种原癌基 冈，这是一种凋亡抑制基因，可抑制多种细胞凋亡，不仅在 细胞凋亡的分子调节中起着重要的作用，而且与多种疾病的 发生发展存在密切的关系。目前国内外对Bcl．2基因与肿瘤 的关系研究较多，而与支气管哮喘的相关性研究报道不多。 本研究测定支气管哮喘患者外周血白细胞Bcl。2基因mRNA 的表达量及其血清中蛋白的含量，从基因水平研究BCL．2在 支气管哮喘中的表达及其相互关系。初步探讨Bcl．2基因在 支气管哮喘的发生、发展中的生物学意义，从而为支气管哮 喘新的治疗方法如基因治疗提供一定的理论依据。 方法：选取20例2004～2005年在海南省人民医院门诊 就诊或住院的支气管哮喘中重度发作患者为实验组，20例无 支气管哮喘、变态反应性疾病的健康人为对照组。采取抗凝 用Trist矗刑试剂按试剂盒说明提取总RNA，--80。超低温冰 Ex 反转录成cDNA；第二步：用Premix TaqlM酶对反转录 中文摘要 后的eDNA进行扩增，10倍梯度稀释cDNA模板，分别为 海生工生物工程技术服务有限公司合成上游引物：5’．GGT TGTGGT GCCACC CCACCT-3’，下游引物：5’．CTTCAC ”℃TGGCCCAGATAG G．3‘，用美国PE公司5700型实时 荧光定量PCR仪进行检测，以GAPDH基因为对照基因，用 仪器附带SDS软件自动算出Bcl一2基因与对照基因比值，确 定Bcl．2基因的相对含量。同时抽取抗凝静脉血2ml，伊红 染色，光学显微镜下外周血嗜酸性粒细胞计数。抽取不抗凝 静脉血2ml，分离血清，采用澳大利亚Bender Medsystems 公司人Bcl．2蛋白检测试剂盒，按试剂盒说明操作，通过酶 6．12 联免疫吸附法(ELISA)检测Bcl．2蛋白含量。应用SAS 计算机软件对实验结果进行统计学分析。 结果：支气管哮喘患者外周血嗜酸性粒细胞计数较正常 对照组比较有非常显著性增加(Po．01)，20例支气管哮喘 患者外周血细胞Bcl．2基因mRNA表达量高于正常对照组， 两组有非常显著性差异(PO．01)，外周血清Bcl．2蛋白含量 与正常对照组差异无显著性(PO．01)。 结论：支气管哮喘足以外周血嗜酸性粒细胞计数增高， 气道嗜酸性粒细胞浸润为特征的慢性炎症。本研究证实支气 管哮喘患者外周血嗜酸性粒细胞显著增多。支气管哮喘患者 因在支气管哮喘发病中具有一定的作用和意义，Bcl．2基因 与支气管哮Ⅱ嵩密切相关。而外周血清中Bcl．2蛋白含量与支 气管哮喘的发病无直接相关。 关键词：支气管哮喘；细胞凋亡；Bcl．2基因；荧光定