测定羟自由基的高效毛细管电泳研究.pdfVIP

V01．30 第30卷专辑 南昌大学学报(理科版) ． Suppl 2006年9月 JournalofNanchangUniversity(NaturalScience) Sept．2006 文章编号：1006一0464(2006)专辑一0550—02 测定羟自由基的高效毛细管电泳研究 赵兴玲，王 巍，曹秋娥 (云南大学教育部自然资源药物化学重点实验室化学科学与工程学院，云南昆明 650091) 摘 要：采用Fenton反应产生·OH，以水杨酸作为·014捕获剂，在优化了分离钡4定条件后，建立了一个测定·OH 的高效毛细管电泳方法，并用该方法研究了一些酚酸类物质阿魏酸、绿原酸和咖啡酸以及含有这些组分的某些中 药如金银花、川芎、当归、杜仲及蒲公英的水提液对·OH的清除能力。 关键词：羟自由基；高嫂毛细管电泳；酸类物质；中药 中图分类号：0657．8 文献标识码：A ·OH足目前所知对生物体毒性最强、危害最 而导致水杨酸浓度降低。因此，通过体系中水杨酸 大的一种活性氧自由，它可以通过电子转移、加成或 浓度的变化可以反映·OH存在量，以此可以检测 脱氢等方式与生物体内的多种分子作用，造成糖、氨 ·OH。 基酸、蛋白质、核酸和脂类等物质的氧化性损伤，使 在此体系中加入抗氧化剂后，由于抗氧化剂对 细胞坏死或突变H。’，因此，·OH的检测与清除剂 ·OH的清除作用，使水杨酸浓度增加，所以，通过 的研究引起了广泛兴趣。对·OH的检测与清除研 检测清除剂存在下水杨酸的浓度变化可表征活性物 究目前常采用的方法有电子顺磁共振谱、紫外一可 质的抗氧化能力。具体实验方法如下： 见光度法、荧光光谱法和高效液相色谱法等’41，但 依次加入一定体积的清除剂、0．5mL水杨酸溶 以高效毛细管电泳(HPCE)研究·OH的检测与清液(1．05ms／mL)‘、0．06mL过氧化氢(0．48％)和0． 1 mL 除剂还极少见文献报道。本文建立了一个测定· FeSO。溶液(40mmoL／L)，混合均匀后，静置10 Oil的HPCE方法，并用该法研究了一些酚酸类物min，再加入0．1mL的内标物咖啡因溶液(1．04mg／ 质对羟自由基的清除能力。该方法有作为复杂体系 mL)，用水稀释至2．0mL，采用HPCE方法分离检测 中酚酸类物质抗氧化活性筛选的应用前景。 (空白实验用相同体积的重蒸水代替清除剂)。 抗氧化剂清除·OH的清除率为：清除率(或抑 1 实验部分 1．1 高效毛细管电泳方法 代表没有·OH存在时水杨酸的浓度；c。代表捕获 mmol／LSDS一 电泳介质为12mmol／L硼砂一3 ·OH后水杨酸的浓度；C：代表清除剂存在时捕获 5％(v／v)乙腈的缓冲溶液(pH8．55)；电泳仪器(P／·OH后水杨酸的浓度)。 Coul— ACETMMDQ型高效毛细管电泳仪，Beckman 2结果与讨论 ter，美国)条件为：分离电压22．5kV，柱温20℃， 2．1 PDA检测器(检测波长为207am)；采用压力(0．5 测定·OH的高效毛细管电泳方法研究 447．38 nm P．8．i．，3 Pa)进样5．