水蛭酶提取工艺地研究.pdfVIP

中华中医药学会第九届制剂学术研讨会论文汇编 本课题研究了水蛭科学合理的提取纯化方法，工艺验证实验表明，该工艺重现性良好。 蛋白和多肽类物质在超滤过程中极易吸附，因此，为减少提取液有效成分损失，在超滤时加 大药液量，且只通过30kD和3kD两根柱子，并在超滤后加纯水洗下吸附的有效成分。结果 显示，加大超滤药液量后，分子量3kD的部分药效由提取液总药效的41．14％上升至 (53．57％+3．79％)=57．36％；与此同时，由于超滤结束后增加了一次蒸馏水冲洗步骤，使得 抗凝活力总损失量由36．83％降低至16．46％。由此可以得出结论，在工业生产中，适当加大 超滤药液的体积，且增加水洗过程，可以有效降低药效损失。本研究工作尚存在不足之处， 由于试验条件的限制未能作出该注射液的指纹图谱，有待于进一步研究。 水蛭酶提取工艺的研究 侯林田景振 山东中医药大学(济南250355) 摘要：目的通过实验优选水蛭酶提取工艺条件。方法以体外的抗凝活力为指标，进行单因素试验，考察 胃酶加入量、提取温度、提取时间、药液pH对有效成分提取的影响；用正交试验优选提取条件。结果优 选的提取工艺为：温度42℃，pHl．5，加酶量为300U／g，提取4h。结论实验表明，此方法提取率高，工 艺合理。 关键词：水蛭；酶提取工艺 中药水蛭为环节动物门水蛭科(Hirudinidae)动物蚂蟥WhitmaniaWhitman、柳叶 pigra aeranulata 蚂蟥WhitmaniaWhitman或水蛭HinudeWhitman的干燥体，最早收载于 nipponica 《神农本草经》，作为常用的活血化瘀中药，具有破血、逐瘀、通经之功能，在中药临床广 泛应用于脑血栓、冠心病、脑水肿等疾病的治疗。现代研究表明，水蛭抗凝血、抗血栓的有 效成分为蛋白质、多肽等物质【11，目前的研究多集中在水蛭素上。据报道水蛭素是迄今为止 世界上发现的最强的天然抗凝血抑制剂之一。然而水蛭素仅存在于新鲜水蛭的唾液中，且会 被胃蛋白酶破坏，而大量实验表明中药水蛭不含水蛭素，但水蛭粉及水蛭炮制品口服均有效 12,31，因此可以考虑水蛭中应含有其它抗凝血、抗血栓成分。本实验结合水蛭及其有效成分 的性质，模拟体内生物消化过程，利用生物酶提取方法提取水蛭有效成分并利用正交设计的 方法对其提取工艺进行了优选，并为水蛭药效物质的研究和含水蛭中成药的生产提供基础。 1试验材料与仪器 1．1试验材料 水蛭购自济南建联中药店，经鉴定实验室周风琴教授鉴定为宽体金线蛭(Whitmania pigra 酶(湖南一格制药有限公司，批号041209．1)；而s(三羟甲基氨基甲烷)(购于上海生工生 物工程有限公司，批号0114S04)：其他试剂均为分析纯。 1．2试验仪器 ． SYC．15超级恒温水浴(南京桑力电子设备厂)；LD4．2A低速离心机(北京医用离心机 116 中华中医药学会制剂分会第九届学术研讨会论文集 BFM．6T贝利微粉机(济南倍力粉技术工 厂)；PHS一3C精密型pH计(上海三信仪表厂)； 程有限公司)： 2实验内容 2．1体外抗凝试验 按《中国药典》2005版水蛭项下所述方法进行【4】。 酶用生理盐水稀释成20NIH／ml。 15x100小试管中，精密加入样品液30～509l，混匀，37℃水浴中缓缓加上述浓度凝血酶(每 分钟59l，轻轻摇匀)，直至凝固，记录消耗凝血酶溶液的体积数，按下式计算： U=．NCIVl，V2 式中U：抗凝血酶活力，单位ATU／ml。N：稀释倍数。 Cl：凝血酶溶液的浓度(U／m1)VI：消耗凝 血酶溶液的体积(ttl)V2：样品溶液加入量(山)中和一个国际单位的凝血酶的量，为一个抗凝活性单位， 即IATU。 2．2提取工艺的单因素考察 据文献报道【7】影响酶提取工艺的因素主要有