高效液相色谱用于粗核黄素制剂中维生素A、D、E、K在HPLC上的定量分析.pdfVIP

粗制核黄素制剂中维生素A、DEK在HPLC上的定量分析 王玉梅 唐品志 王善莲* （中国科学院生物物理研究所，北京） 维生素是天然的有机化合物，种类很 多，其性质差异悬殊，有胺类 如（B1、醛 实 验 部 分 类 如（B6 、醇类、酸类 如（A）和酚、酯 1．仪器 日立635A型高效液相色谱仪，单波 类化合物。但按溶解性可分成脂溶性如A、 长紫外分光光度计检测；柱子：内径4毫米长250毫米不 DEK等和水溶性如B1、B2、B6、B12、C、H、 锈钢柱，填料为天津试剂 二厂生产的硅胶键合十八烷基硅 烷 (YWG-18H87)粒度10 2微米，填充压力为350公 PP等两大类。由于它们的种类很多，其含量 斤／厘米2，柱效为1万塔板／米 苯（）；记录仪-056 有时也很低，天然产物的成分又很复杂，因 2．试剂 维生素A 英（国Koch-Light公司产 此需要建立具有灵敏、准确、快速的测定方 品）。 法。以往常用的比色法、分光光度法、荧光 维生素ID、E、K 德（ E.Merck厂产品）。其余试剂 法以及微生物法等只能测定某一种维生素的 均为国产分析纯。 含量，而不适用于同时测定几种维生素。近 3．样品处理 取适量试样，加10-15倍量的 十年来高效液相色谱 HPLC）发展很快， 25%氢氧化钠溶液于70℃水浴中回流1分钟，皂化后用石 并已广泛地应用于生化领域中维生素的分 测醚-乙醚 (1:1)提取，经真空抽至近干，迅速以异丙醇 溶解后上机进行测定。由于维生素见光容易分解，因此全 析[2,3]。 部操作应注意防止受强光照射。 粗制核黄素是以豆腐渣经接种阿氏假囊 酵母菌而生产的一种制剂 亦（称为维酶素制 结 果 与 讨 论 剂）。该制剂已作为某些呼吸酶类和解毒酶 由于反相色谱适应性强，应用范围广， 类的酶促增效剂被推广应用，在治疗萎缩性 因此，我们在YWG-C18反相色谱柱上用含 胃炎和防止食管 贲（门）细胞的增生等方面 有少量醋酸盐缓冲溶液的甲醇-异丙醇-冲洗 已取得了初步疗效。为了探讨该制剂对细胞 液体系来冲洗，四种脂溶性维生素A、D、E、 作用和疗效的机理，需要了解其有效成分的 K在16分钟内可苫获得比较满意的分离 见（图 含量。本文报导以HPLC法、应用YWG- 1和2）。 C18反相柱、用甲醇-异丙醇-醋酸盐恒定 本文采用波长254毫微米作为检测波 组成的淋洗液、测定粗制核黄素制剂中脂溶 长，脂溶性维生素ADK在该波长都有一 性维生素。实验结果表明该制剂含有四种脂 个强的紫外吸收。而维生素E在此波长的吸 溶性维生素A、D、E、K 应用本法于分离和 收很低。维生素E比其它三种维生素至少低 测定这四种脂溶性维生素比已往R.C.Will- 10倍以上。维生素标准液经提取操作后，其 iams等人[2]所报导的梯度淋洗法简便，可 检测量与峰高呈线性关系。工作曲线通过零 在十六分钟内完成定量测定，平均回收率达 点 见（图3）。 到95％以上。 由于谥脂溶性维生素A、D、E、K在酸性条 件下比在碱性条件下稳定，因此我们试验了 pH4.5、5.8和6.5的醋酸铵-醋酸缓冲溶液的 甲醇-异丙醇冲洗液体系，均可达到分离的效