转基因杨树作为新造纸资源植物地研究.pdfVIP

第二届全国环境化学学术报告会论文集 转基因杨树作为新造纸资源植物的研究 李亚红 上海交通大学环境科学与工程学院， 上海，200240 ， 摘要¨帆浆造纸工业中，化学方法去除木质素类原料既消耗大量化学品与能源，叉会造成严重的环境污染． 许多研究都致力于对遣纸树种进行基因改良采改进脱木质素工艺．我们用反义RNA技术得到了过氧化物酶 负调节的转基因杨树，研究了它们的木质素特性和制浆性能0结果表明转基因杨树生长正常，木质素含量 降低，可望作为新的造纸资源植物生产出适合造纸工业用的木材． 关键词：木质素，转基因杨树， 反义RNA，过氧化物酶，造纸工业 0前言 造纸工业的污染一直是我国环保行业的关注焦点之一。木质索是严重影响制浆质量和工 艺的重要因素，造纸原料中的高木质素含量是制浆造纸过程产生污染的根本原因之～。近年 来，随着植物分子生物学的深入发展，人们开始致力于应用基因工程手段来调控木质素的生 物合成，开发更适合于制浆造纸工业的植物资源，试图从源头上彻底解决造纸污染问题。木 质素生物合成涉及到很多酶，如苯丙氨酸裂解酶(PAL：Phenylalanineammonia-lyase)，咖啡酸 acid 甲基转移酶(COMT：Caffeic alcohol dehydrogenase)，等等。其中，木质素生物合成的最后一步涉及到木质素单体的氧化， 限速酶普遍被认为是过氧化物酶(POD：Pemxidase)。目前世界上对此研究也较少，国内尚属 空白。本研究通过将POD基因(prxA3a)从植物中分离克隆，反向导入杨树中，从而抑制 POD基因的表达，获得了能正常生长的转基因杨树。组织化学分析和化学分析均表明木质 素结构和含量发生了变化，制浆试验也证明了此项技术是有应用前景的。 1材料与方法 1．1植物材料与培养条件 杂交杨树(P印Hms 光照，8小时黑暗。 1．2木粉的制取 将植物茎部剥皮，切成小木片，研磨，过80目筛。得到的木粉用乙醇／苯混合液(h 2，vlv)萃取6小时后，用热水浸洗，冷冻干燥后备用。 1．3木质素含量分析 1．3．1 bromide方法 AcetyI 2新7夕) 第二届全国环境化学学术报告会论文集 ml的容量瓶，其中已 m1)后，拧紧瓶盖．在70。C水浴中反应30分钟。消化后的溶液移入50 加有10ml的2MNaOH和12 IIll醋酸。用醋酸溶液定容。分光光度法检测木质素含量。 1．3．2 KIason方法 100mg木粉与72％的冰硫酸在20C水浴中反应4小时。反应内容物移入装有蒸馏水的 烧瓶中，加水稀释．使硫酸浓度为3％。混合液沸腾4小时，用回流冷凝器保证定容。消化 后的热溶液通过砂芯漏斗过滤，并用热水冲洗，残渣于60(2烘至恒重，即为木质素含量。 1．4组织化学染色 我们采用Matlle组织染色。30 m厚的茎切片依次用1％高锰酸钾，3％盐酸和浓氨水 处理后，显微镜下观察拍照。 1．5制浆试验 我们对野生型和转基因型杨树分别进行了碱法制浆和醋酸法制浆的试验研究。考察了不 同制浆条件下的得浆率和木质素含量。 2结果与分析 2．1转基因杨树的表型 转基因植物能否保持正常的生长发育状态，一直是人们的关注要点。 我们观察到，在 相同的生长条件下，转基因株系的生长形态和生长速度正常，未发现异常现象，植株高度与 叶片大小与同期的野生型植株基本一致。 2．2木质素含量分析 本研究采用反义RNA技术来抑制转基因杨树中过氧化物酶的表达，从而达到降低木质 素含量的目的。通过对木质素含量的化学分析，我们检测到了木质素含量的降低。在3个月 的转基因树中，与野生型对照，最高可降低20％。树龄为2年的转基因型的木质素含量变 化没有幼树显著，下降率在5％一10％。 2．3组织染色观察 通过对植株切片的Matlle组织染色观察，所有切片均呈红色，表明了在这些组织部位 己发生了木质化。同时，与野生株对照，有些转基因株的木部导管细胞有所减