猪源乳杆菌的分离鉴定和生物特性研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集(2004年) 种菌量的多少、标准酸的纯度和标准曲线的制备等．因此培养基成分过滤、有机酸萃取 等十分必要即，95,9q。标准曲线制备程序要和培养液分析程序一致。其结果才有可比性。另 外在操作过程中，有机酸色谱峰的保留时间经常出现一定程度的变化，甚至同一根色谱 柱随着工作时间的增加，保留时间逐渐延长，因此必须经常用标准试剂校正，确保色谱 峰化学定性的准确性【97l。 本实验对26株厌氧菌进行气相色谱分析所得结果，基本与其它文献报道的相符98。…。 26株厌氧菌中包括乳酸杆菌7株，脆弱类杆菌6株，核梭杆菌和念珠状优杆菌各4株，双 歧杆菌和诺维氏梭菌各2株，四联消化链球菌1株。 参考文献(作者略) 猪源乳杆菌的分离鉴定与生物特性研究‘ 姜永康曹国文曾代勤徐登峰戴荣国陈春林周淑兰 (重庆市养猪科学研究院荣昌402460) 本研究从健康乳猪肠道分离筛选到5株乳杆菌，所选菌株能耐受浓度为O．8％～1．O％ 的牛胆盐，对pH3．0的酸度有较强的抵抗力，其代谢产物对3株致病菌有一定程度的抑 制作用，对小白鼠安全无毒。具备微生态制剂的基本条件，可作为益生菌种使用。 关键词：猪乳杆菌生物特性研究 微生态制剂是一种新型活菌制剂，近年来国内外发展很快，已广泛用于人类、动物 和植物。在促进动物生长、预防常见疾病以及改善养殖环境等方面，无毒、无副作用、 无污染、无残留、不产生抗药性等。显示出了抗生素无法比拟的优越性，前景广阔，倍 受关注，是当前饲料添加剂研究的一个新热点。然而，开发微生态制剂，菌种的研究是 制剂应用的基础，鉴于此，我们从健康乳猪肠道分离得到5株嗜酸乳杆菌，对其生物特 性作了一定研究．现报告于后。 1材料与方法 1．1动物：15日龄长×荣杂交健康乳猪，由本院猪场提供；18—209昆明小白鼠，购于重 庆医科大学试验动物中心。 按有关文献配制(1l。 1．3试验菌株：标准大肠杆菌K88、987P、F41均从中监所引进。 1．4试剂：牛胆盐、乳酸、醋酸及培养基成份购于市化学试剂公司。 中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集(2004年) 1．5酸度计：Phs．3c，上海雷磁仪器厂。 1．6乳杆菌分离鉴定 剖杀乳猪，腹部消毒，无菌剪开肠道各肠段，用无菌棉拭蘸取十二指肠、空肠、回 肠、盲肠和结肠粘膜粘液，然后在LBS琼脂平板上分区划线涂布接种，37。C～38。E厌氧 培养。48h后挑取疑似乳杆菌的白色菌落，再厌氧纯培养、传代、保存。按《佰杰氏系统 细菌学手册》(第九版)o)从形态、理化特性、代谢产酸等方面鉴定。 1．7耐酸性 将选出的乳杆菌24h培养物，离心沉淀菌悬浮在pH2．0、2．5、3．0的MRS培养液中， 37。c保温3h。通过保温前后活菌计数结果计算出细菌存活率。 1．8胆盐酎受性试验 2％一1O％ 各菌株接种MRS肉汤，37℃24h离心，取沉淀菌体分别悬浮于含牛胆盐0 的MRS液中，37。C50r／min保温3h，测定细菌存活率。 1．9高温酎受性试验 将选出的乳杆菌接种MRS培养液，37℃培养24h后，置于606C水浴中处理，分别于 处理前、处理40rain、70rain时取样测定细菌存活率。 1．10对致病菌抑菌谱测定 参照有关文献o’，采用琼脂扩散法进行。将致病性大肠杆菌菌悬液均匀涂布于PYG 琼脂平板上，用直径6mm无菌打孔器打孔并封底．再将乳酸菌的36h培养物在5000r／rain 离心10rain．吸取上清液70斗I加入孔中．同时以pH3．5乳酸、醋酸和空白培养液作对照， 置37℃培养18h。测量抑菌圈直径。 1．1l安全性试验 取体重18—209的昆明种小白鼠．每组8只，雌雄各半．将各株乳杆菌按3×10·oCfu／kg 经腹腔分别注射小白鼠各l组。同时设空白MRs肉汤腹腔注射对照组。饲养观察两周， 记录小白鼠的发病、死亡情况。 1．12乳酸定性测定 ． 按文献{4方法，采用纸层析法。本试验结合乳酸菌的糖类发酵试验进行。如果产酸． 再做纸层析，纸层析的溶剂系统为水：苯甲醇：正丁醇=l：5：5，然后加1％的