重组人骨形成蛋白(rhBMP-2)质控方法与质量标准的研究.pdfVIP

重组人骨形成蛋白(rhBMP．2) 质控方法和质量标准的研究 史新昌 韩春梅李响 刘兰 丁有学饶春明 中国药品生物制品检定所生化室，北京，100050 目的骨形成蛋白(Bone Protein，West Morphogenetic blotting法进行鉴别试验，结果为阳性，符合标 BMP)是一类蛋白家族，BMP一2是BMPs家族中的一准；以胰蛋白酶裂解法进行肽图分析，结果供试品与 种，属于TGF．p超家族成员，能诱导机体内的间冲质对照品图形一致，符合标准；以Edman降解法测定 细胞不可逆的分化为软骨和骨细胞。本文以大肠杆 菌原核系统表达的rhBMP-2进行质量研究，建立相PLYV标准；其他项目外源性DNA残留量、宿主菌蛋 应的质量标准及检定方法。方法与结果以小鼠体 白残留量、残余抗生素活性、细菌内毒素含量等按 内异位成骨试验测定rhBMP．2的生物学活性，用钙 2005版《中华人民共和国药典》三部规定进行检定， 测试盒，在96孑L板中，通过酶联测定仪测定，平均每 各项指标均符合要求。结论综上所述，建立的质控 方法和质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控 毫克蛋白异位钙沉积量为5．9×lOmg，符合≥2．0 的特点，可用于重组人骨形成蛋白(rhBMP．2)产品的 ×lomg标准；以HPLC．SEC法测定纯度为97．6％， 符合≥95．O％标准；以SDS，PAGE法测定分子量为 常规检定。应用本研究建立的质控方法和质量标 12．5KD，符合12．2KD±10％标准；以快速电泳法测准，对我国一家单位首次申报注册检验的rhBMP-2 定等电点为4．8，符合4．5—5．4标准；以紫外光谱扫进行了质量复核，其各项指标均符合《中华人民共和 描法测定最大吸光值为277，符合278±3标准；以国药典》的有关要求。 ·279·