中国番茄黄化曲叶病毒DNAβ缺失突变体和异源病毒的互作研究.pdfVIP

中国番茄黄化曲叶病毒DNAil缺失突变体 与异源病毒的互作研究 钱亚娟，郭维，周雪平 (浙江大学生物技术所，浙江杭州310029) 【摘要】卫星DNAl3是与一些单组份双生病毒伴随的并是病毒在自然寄主上引起典 型症状所必需的致病相关分子。迄今发现的所有DNA[3分子在互补链上都含有一个 位置和大小保守的膨J基因。本文对中国番茄黄化曲叶病毒的缺失膨．，基因的 1 DNAl3突变体(DNAAC13)与异源病毒接种后的致病性及稳定性进行了研究。PCR 和Southern印迹证实该突变体能利用赛葵黄脉病毒、烟草曲茎病毒、中国胜红蓟 黄脉病毒、假马鞭曲叶病毒等多种异源双生病毒复制并系统侵染本氏烟。接种后 65天内的PCR检测和序列分析显示，该突变体与其它辅助双生病毒接种后在寄主 细胞中的复制是稳定。 关键词：双生病毒；DNAl3；／rl基因；异源辅助病毒：致病性：稳定性 中图分类号：S432．41文献标识码：A 文献编号： 双生病毒是一类世界范围内广泛发生的具有孪生颗粒形态的植物单链DNA 病毒【l】。多数双生病毒含有2个大小为2．5--一3．0kb的单链环状DNA(ssDNA) 组份，称DNA．A和DNA．B，而有些双生病毒仅含有一个组份，即DNA．A。近 年来，在单组分双生病毒木尔坦棉花曲叶病毒(CLCuMV)【21、胜红蓟黄脉病毒 分离和鉴定了一类新型的卫星DNA分子，称谓DNAl3。除了茎环结构中的九核 依赖于DNA．A进行复制、移动和包壳。所有已知的DNAl3分子互补链上都编码 一个大小和位置保守的夕C』基因瞪J 分双生病毒，致病性测定表明，TYLCCNV单独能系统侵染本氏烟、心叶烟等寄 主，但不诱导明显的症状，当与DNAl3共同侵染时则引起典型的曲叶、耳突等 症、状【酗。对缺失卢C_f基因的DNAl3突变体的致病性测定表明，卢CJ基因是症状诱 基金项目：国家杰出青年基金(N：国家自然科学基金(N资助项目 作者简介：钱亚娟(1972一)，女，浙江杭州人，博士，从事病毒分子生物学方向的研究。 通讯作者：周雪平(E·mail：zzhou@zj．．edu．cn)：电话：0571 ● 导必需的，但缺失突变体仍能有效地复制【91。通过引入多克隆位点，TYLCCNV DNA[3已改造为一种可以有效地诱导基因沉默的卫星DNA载体f10】。不同的双生 DNA载体仅能在茄科植物上诱导基因沉默，如TYLCCNV DNAl3突变体能利用 异源病毒稳定复制，则无疑可以扩大TYLCCNV卫星DNA载体的寄主范围，使 该卫星DNA载体可以在多种植物上诱导基因沉默。为此，我们研究了缺失pcl 基因的TYLCCNV DNAB突变体与异源病毒之间的相互作用。 材料与方法 1实验材料 的侵染性克隆均由本实验室构建。 2农杆菌接种 将含病毒或卫星的侵染性克隆的农杆菌在含有Km和Sm的YEP液体培养 基中28C培养至OD600为0．6．0．8，并按以下组合等比例混匀菌液：1)病毒与 TYLCCNV DNAACl DNAIB；2)病毒与TYLCCNV p。取O．2ml混合菌液在距根 部1-2cm处或植株叶柄处分别注射接种4-6叶期本氏烟【6】．以病毒单独接种作对 照。接种植株置于防虫温室，在25。C、16hr光照条件下培养并定期观察症状。 3总DNA提取和PCR扩增 各种组合接种的植株在接种后(dpi)21天分别取上部叶片(约0．19)，利用 ACC ACTACGCTACGCAGCA ACCTACCCTCCC GCC一3’)和Beta02(5-GGT