生物制药(五).pptVIP

2、抑制蛋白质的合成 （1）抑制氨基酸的活化 吲哚霉素与Trp 竞争与Trp激活酶结合抑制了Trp-tRNATrp的形成，因而阻止了蛋白质的合成。 （2）抑制蛋白质合成的起始 起码密码：AUG 编码 Met 真核 fMet 原核 COOH-CH-CH2-CH2-SCH3 ︱ NH ︱ O CH fMet-N-甲酰甲硫氨酸 （四）、溶解氧影响与控制 溶解氧（dissolved oxygen, DO）是指溶解于培养液中的氧。 溶解氧浓度由供氧和需氧两方面所决定，供氧 oxygen supply 是指氧溶解于培养液的过程。菌体吸收溶解氧的过程是耗氧（需氧）过程。不同菌种对溶解氧量的需求是不同的，有一个适宜的范围，必须通过试验确定临界氧浓度和最适氧浓度，并在发酵中维持最适氧浓度。 临界氧浓度：不影响呼吸或产物合成的最低溶解氧浓度。 溶解氧控制 直接提高溶解氧：增加氧传递推动力和通气速率等。间接控制溶解氧：控制菌体浓度。 工艺控制方法：控制补料速度，调节温度（降低），培养基（配方，液化，降低粘度），中间补水，添加表面活性剂（消沫剂种类及数量次数时间）。 （五）、 CO2的影响及其控制 1、CO2对发酵的影响 CO2对微生物生长或发酵具有刺激或抑制作用，还影响培养基的酸－碱平衡。 CO2对细胞的影响机理： ① 直接影响细胞膜的结构，从而影响细胞的形态和生理过程。 ② 与其他物质发生化学反应，或与生长必需的金属离子形成碳酸盐沉淀，间接影响菌体的生长和发酵产物的合成。 2、 CO2浓度的控制 通气和搅拌是控制CO2浓度的一种方法。 降低通气量和搅拌速率，有利于增加CO2在发酵液中的浓度，反之，就会减小CO2浓度。 另外，CO2的产生与补料工艺控制密切相关，如：青霉素发酵时，补糖会增加排气中CO2浓度和降低培养液的pH。 （六）、 补料的作用和控制 1、 补料和放料 补料（fill）：间歇或连续的补加一种或多种成分的新鲜培养基就是补料。 放料（wihtdraw）：发酵到一定时间，产生了代谢产物，放出一部分发酵液（进行提取），又称带放。补料、放料的作用在于：补充营养物质；改善发酵液流变学性质；调控培养液的pH；解除基质过浓的抑制、产物的反馈抑制和葡萄糖分解阻遏效应；避免在分批发酵中因一次性投糖过多造成细胞大量生长、耗氧过多而供氧不足的状况。 2、 补料控制系统 （1）、反馈控制系统 由传感器、控制器、驱动器组成。依据溶氧、pH、呼吸熵、排气中CO2分压，代谢产物浓度等指标直接控制。 （2）、非反馈控制系统 非反馈控制流加系统是不通过固定的反馈控制参数，而通过经验或数学最大优化模型法，得到最优流加操作曲线，从而实现流加控制。 （六）、 泡沫的影响及其控制 1．泡沫的影响 减少装料量； 造成大量逃液，增加污染的机率； 泡沫使菌体呼吸受阻，代谢异常或自溶。 2．泡沫控制 （1）培养基与工艺调整。调整培养基的成分，少加或缓慢加易起泡的原材料；改变某些物理化学参数，如pH，升高温度，减少通气和降低搅拌速率；改变发酵工艺，如采用分次投料。 （2）菌种选育。筛选出不产生流态泡沫的菌种。 （3）机械消沫（mechanical defoaming ） 。利用机械强烈振动或压力变化而使泡沫破裂。 （4）化学消沫。加入消沫剂 defoaming agent ，降低泡沫的液膜强度和表面黏度，使泡沫破裂。常用的消沫剂有天然油脂类 lipid 、高碳醇脂肪酸 high alcohol fatty acid 和酯类 ester 、聚醚类 polyether 、硅酮类 silicone 。 （七）、发酵终点的判断 判断原则：高产量、低成本。 以原料和发酵成本占整个生产成本为主的药品，主要在于提高产率（单位体积、单位时间内的产量，kg/ hm3 ）、 得率（转化率，单位原料生产的产物量，kg产物/kg原料）、 发酵系数（单位发酵周期内的发酵体积生成的产物，kg产物/ 容积m3周期h ）。 影响发酵终点判断的因素： 1．经济因素 发酵终点应是最低成本获得最大生产能力的时间。 2．产品质量 3. 生物、物理、化学指标 主要产物浓度、过滤速度、菌体形态、氨基氮、pH、DO、发酵液的外观和粘度等。 4、特殊因素 如染菌、代谢异常等情况。 三、 灭菌操作技术 杂菌（contaminated microbe）：对于发酵生产过程，除生产菌以外的任何微生物。 污染（contamination）：感染杂菌的发酵体系。 消毒 disinfection ：指用物理或化学方法杀灭或清除病原微生物（pathogen），达到无害化程度的过程，只能杀死营养体，而不能杀灭芽孢体，杀灭率99.9%以上。 灭菌（sterilization）：指用物理或化学方法杀灭或清除物料