血卟啉-赫赛汀光敏免疫偶联物的制备及光敏免疫疗效研究_医学论文.docVIP

血卟啉-赫赛汀光敏免疫偶联物的制备及光敏免疫疗效研究_医学论文 血卟啉-赫赛汀光敏免疫偶联物的制备及光敏免疫疗效研究_医学论文 作者：陈璐，罗荣城，李黎波，严 晓，丁雪梅 【关键词】 血卟啉 　　摘要：目的 制备光敏剂血卟啉（HP）-单克隆抗体赫赛汀的光敏免疫偶联物，并观察偶联物对BT-474人乳腺癌细胞的杀伤及凋亡作用。 方法 以碳二亚胺为缩合剂，化学制备HP-赫赛汀光敏免疫偶联物。给予波长630 nm激光照射后，用MTT法、FCM检测比较免疫偶联物和游离HP对BT-474人乳腺癌细胞的杀伤及凋亡作用。 结果 含同剂量HP的偶联物较游离HP对BT-474细胞的杀伤及凋亡效果明显增强（0.05）。 结论 成功制备HP-赫赛汀光敏免疫偶联物，该偶联物对BT-474人乳腺癌细胞的杀伤作用强于游离HP。 　　关键词：光免疫疗法；血卟啉；赫赛汀；光敏免疫偶联物；BT-474；乳腺肿瘤 　　Abstract: Objective To prepare the photoimmunoconjucate of hematoporphyrin (HP) and herceptin, and study its killing and apoptosis-inducing effect on tumor cells BT-474. Methods HP-herceptin photoimmunoconjugate was synthesized with EDCI as the condensator. After exposure of the cells to 630 nm laser, the killing effect of the conjugate and cell apoptosis were evaluated by MTT assay and flow cytometry. Results Compared with free HP at equivalent dose, the immune reactivity, killing effect and the apoptosis-inducing effect of HP-herceptin immunoconjugate on BT-474 cells was enhanced (0.05). Conclusion The killing effect of HP-Herceptin immunoconjugate is stronger than free HP on BT-474 cells. 　　Key words: photoimmunotherapy hematoporphyrin herceptin photoimmunoconjucate BT-474 cells breast neoplasms 　　光动力疗法是一种正在发展中的治疗恶性肿瘤的新型治疗手段，临床上已用于多种肿瘤的治疗，但由于光敏剂组织选择性差，常易引起光毒性反应。为了减轻不良反应，选用能与肿瘤细胞特异性结合的单克隆抗体为载药工具，将光敏剂和抗体进行化学链接，由抗体进行导向，使光敏剂与特定肿瘤细胞进行特异性结合，达到靶向给药的目的，提高治疗的依从性[1~3]。本研究选用赫赛汀为特异性抗体，光敏剂血卟啉（HP）为模药，制备HP-赫赛汀免疫偶联物并对其杀伤效应进行细胞学评价，旨在为其进一步的临床应用研究提供实验基础。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料和试剂 　　1.1.1 主要试剂 血卟啉注射液（重庆华鼎现代生物制药公司生产），单克隆抗体赫赛汀（上海罗氏公司生产），碳二亚胺（EDCI）、二抗Biotin-G、三抗Streptaridin-HRP、四甲基偶氮唑盐（MTT）为Sigma公司产品，凋亡试剂盒Annexin V-FITC Kit 试剂盒购自晶美公司。其余试剂均为分析纯。 　　1.1.2 仪器 Sephadex G-25葡萄糖凝胶柱（广州展晨生物科技有限公司），UNICAM UA500紫外分光光度计（英国Thermo Spectronic公司），酶标仪（Bio-Rad 550型），流式细胞仪（FACS Becton Dickinson FACS Calibur型）。 　　1.1.3 光源 DIOMED630型半导体激光治疗机（英国激光仪器有限公司生产），激光波长为630 nm。 　　1.1.4 细胞系 BT-474人乳腺癌细胞系购自于北京协和医科大学基础研究室。 　　1.2 光敏免疫偶联物HP-Herceptin的制备与纯化 　　参照文献方法[4]。在含有适量浓度EDCI水溶液的反应瓶中，依次加入HP、DMF和单抗，室温搅拌反应2 h后，