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第3讲：生物质谱 Bio - mass spectrometry，Bio-MS 重庆医科大学药学院 母昭德 本讲介绍以下内容： Ⅰ、质谱分析法，质谱仪，质谱图 Ⅱ、生物质谱 Ⅲ、基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱 Ⅳ、电喷雾电离质谱 Ⅰ、质谱分析法，质谱仪，质谱图 质谱分析法（mass spectrometry，MS） 是将化合物形成离子和碎片离子，按质荷比（m/z）的不同进行分离，来进行成分和结构分析的方法。 质谱分析中，多种离子化技术均可使物质分子失去外层价电子形成分子离子（molecular ion，M+），分子离子中的化学键还可以继续发生某些有规律的断裂而形成不同质量的碎片离子（fragment ion）： 质谱仪的构成 质谱图 质谱分析中，按各离子m/z的顺序及相对强度大小记录分析结果的图谱即为质谱图。由于图谱中离子的质量及相对强度是各物质所特有的，即反映了物质的性质和结构特点，因此通过质谱解析可以进行物质的成分和结构分析。 常见的质谱图是经过计算机处理后得到的棒图（bar graph）。 Typical Mass Spectrum 质谱法的特点 1、不受被分析试样形态限制 2、灵敏度高，试样用量少，检测限可达到10-11克。 3、分析速度快，完成一次仅需1到几秒，最快可达10-3秒。 4、信息直观，质谱图上的质荷比与离子的质量直接相关，质谱图的解释方便易行。 5、易于实现与色谱联用。 6、应用范围广泛，适用于无机有机物质。 Ⅱ、生物质谱 (Bio - mass spectrometry, Bio-MS) ※是主要用于生物大分子分析的质谱技术。 ※生物质谱要求测定上万甚至是几十万的相对分子质量 。 ※随着电喷雾电离 (Electrospray Ionization，ESI) 和基质辅助激光解吸电离 (Matrix-assisted Laser Desorption / ionization，MALDI) 技术的完善和成熟，生物大分子的质谱分析才得以实现。 Soft ionization(软电离) 质谱分析中采用较低的能量使试样分子电离的技术。采用软电离技术容易获得能指明相对分子质量的准分子离子(M+H)+、(M-H)+，适合于混合物及生物大分子的测定。 在蛋白质组质谱分析中使用的软电离技术主要是田中耕一所创立的基质辅助激光解吸电离 (MALDI) 和约翰·芬所创立的电喷雾电离(ESI) 。 软电离技术的发展不但使质谱技术发生了突破性的革新，而且使质谱技术在生命科学中的应用得到了前所未有的扩展。 生物质谱法可以得到三类质谱图 测定生物大分子准确相对分子质量的质谱图 §以MALDI-TOF获得的准确相对分子质量的质谱图 §以ESI-MS获得的准确相对分子质量的质谱图 肽质量指纹图（ peptide mass fingerprinting, PMF）。以PMF的数据再通过互联网进行数据库搜索。 串联质谱（Tandem MS）图（MS/MS质谱图或MSn质谱图）。以Tandem MS的数据再通过互联网进行数据库搜索。 Tandem MS of BSA 生物质谱技术进行蛋白质鉴定分析的流程 重点介绍两种生物质谱分析方法 基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱 电喷雾电离质谱 Ⅲ、基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱Matrix Assisted Laser Desorption Ionization / Time of Flight Mass Spectra， MALDI-TOF MS 离子源：基质辅助激光解吸电离 质量分析器：飞行时间管 基质辅助激光解吸离子化(Matrix Assisted Laser Desorption Ionization，MALDI) 基质辅助激光解吸离子化 / 飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）是近年来获得快速发展的一种软电离生物质谱。 MALDI技术是1988年由Tanaka和Hillenkamp F两组科学家所建立，从而突破了生物大分子质谱分析的难题。 MALDI是利用一定波长的激光脉冲，在极短的时间间隔，对含被测样品靶物的一个微小区域提供高能量，从固相直接获得离子的电离方法。 MALDI特别适用于对热敏感化合物或不挥发化合物的离子化，因此，在蛋白质组分析中得到了广泛的应用。 MALDI-TOF MS无论是在理论上还是在设计上都具有简单、高效、灵敏、快速、准确、测定质量范围大等特点。 Voyager Biospectrometry Instrumentation Voyager-DE PRO MALDI-TOF Linear or reflector mode operation Positive or negative ion detect