菊花脑多糖及黄酮类化合物分离提取的研究.pdfVIP

第22卷 第3期 江苏教育学院学报(自然科学版) Vo1．22 No．3 2005年9月 JournalofJiangsuInstituteofEducation(NaturalSciences) Sep．，2005 菊花脑多糖及黄酮类化合物分离提取的研究 周 丽 娜 翁 德 宝 (江苏教育学院生物系，南京 210013) 摘 要 本文以菊花脑茎叶为材料，对其多糖及黄酮类化合物的分离提取进行了研究．实验采用石油醚 除脂 ，热水浸提、活性炭脱色、Sevage法除蛋白、乙醇醇析提取、沉淀、干燥等方法研究菊花脑茎叶多糖的提 取工艺并用硫酸一苯酚法对多糖含量进行 了检测．对菊花脑茎叶乙醇提取物用Mg+HCI，Zn+HCI，l％ FeCI，．乙醇液，2％MC1，．乙醇液，1％NaOH进行显色反应，呈现黄酮类化合物性质特征颜色，又通过紫外吸 收光谱法对甲醇提取物进行特征测定，观测到黄酮类化合物的特征吸收峰带．并用HPLC法分析测定其黄 酮醇的含量．结果表明，菊花脑茎叶干品中粗多糖含量为0．29％，粗多糖中精品含量为88．79％，干品中总 黄酮含量为0．203％．其结果证明了菊花脑具有多种医疗保健功效的物质基础，为进一步开发利用提供了 科学依据． 关键词 菊花脑茎叶；多糖；黄酮类化合物；提取；定性试验；定量分析 菊花脑 (ChrysanthemummankingenseHand．Mazz)为菊科菊属多年生草本植物，是南京地区一种传统的栽 培利用野生蔬菜，在安徽黄山等地也有分布．食用部位主要是嫩梢茎叶，具浓郁的菊香味，炒食、做汤清香爽 口，能清凉、明目，调中开 胃，也有解毒、降血压之功效 ¨J．该种植物是野菊 (ChrysanthemumindicumL．)的一 个变种 J．野菊的花、叶人药能消炎、杀菌，含黄酮甙．目前有关菊花脑的有效活性化学成分的研究尚未见报 道．为探讨菊花脑中药用活性成分，以其嫩茎叶为材料，测定其中多糖及黄酮类化合物含量，为证明其保健价 值提供科学依据． 1 材料、试剂和仪器 1．1 材料 菊花脑在2005年3月购 自南京市场，将其茎叶洗净后烘干备用． 1．2 试剂 甲醇、95％乙醇、石油醚、正丁醇、三氯甲烷、三氯乙酸、苯酚等试剂属AR级．标准葡萄糖也为AR 级．槲皮素、山柰酚，异鼠李素对照品均为生化试剂(美国Indofine公司产品)；高纯水 (自制，二次重蒸)；甲醇， 色谱纯． 1．3 仪器 数显恒温水浴锅(HH-6)，索式抽提器，UV1200紫外可见光光度计(北京瑞利分析仪器公司)，扭 力天平，电子天平，离心机(L04．2)，恒温干燥箱，紫外灯，Waters—HPLC(配置：515高敷液相色谱仪，Waters2487 双通道紫外可见光检测器，HSV+4．0色谱数据工作站)． 2 实验方法 2．1 样品菊花脑多糖的提取与检测 2．1．1 样品菊花脑多糖的提取 。一】 2．1．1．1 预处理 将菊花脑茎叶干品研细成粉末，称取7．0g，置于索氏抽提器内用石油醚回流抽提 16h，除 脂．除脂后样品风干，保存． 2．1．1．2 热水浴浸提 将脱脂样品置于三角烧瓶中，按料液比1：10～40加水，90℃水浴2h，然后过滤，保留 · 翁德宝，男，教授，研究方向为营养生物化学与植物资源的开发利用． 一 12— 滤液，滤渣再进行水提，重复3次，合并滤液． 2．1．1．3 脱色 因水提液含有黄绿色素成分，故在滤液中加适量的活性炭，90％水浴 0．5h进行脱色，然后抽 滤，保留滤液． 2．1．1．4 除蛋 白 脱色后的滤液加三氯乙酸静置过夜除蛋 白．由于效果不明显，再用 Sevage法除蛋 白．取 50ml浓溶液，将氯仿按滤液 1／5体积加入，随后再加入氯仿体积 1／5的正丁醇，充分混合振摇20min，离心，分 去水层和溶液层交界处的变性蛋白．上述方法重复两次，得脱蛋 白液． 2．1．1．5 醇析 取 30ml脱蛋 白液加 95％乙醇充分混匀，静置 ，冰箱过夜，析出多糖．抽滤取沉淀，用烘箱干 燥，得到样品粉末 0．002g(w)．加蒸馏水溶解 ，定容到50ml容量瓶内，此为待测液A． 2．1．2 标准 曲线的绘制 2．1．2．1 标准溶液的配制 将适量葡萄糖粉末放