重组人血小板生成素(rhTPO)的探究工作介绍.pdfVIP

娄竞 (沈阳三生药业厦份有眼公司) 重组人血小板生成素简介 受体MPI结合而产生生物学效应。即调节巨核细胞增殖、分化、成熟并分裂形成有功能的 I、 Ⅱ期临床试验的结果。进一步证实TPO能明显刺激血小板生成，增加外周血血小板计致。 TI 系和粒系祖细胞的增殖，并促进干细胞进人增殖周期。上述结果显示TPO将成为临床治疗 血小板减少的特异性最强、最有效的药物。 目前研究TPO领先的包括美国^“日∞公司、QⅢ咖ch公司和沈阳三生制药股份有限公 Gnnvth end De∞l叩mem 在进行血小板动员试验的患者体内产生了中和性抗体。于1998年暂停了这一试验。C∞∞． 前都在进行Ⅲ期临床试验。 ， 三生公司茸1鲫5年起对重组人血小板生成素进行了细胞株构建、产物表达、纯化、梭 定及一系列临床前试验．1997年被国家科委列入国家。863”计划。此后在产品研制、报批 和临床实验等多方面取得了明星进展，截至2002年2月，巳完戚I、Ⅱ期临床试验。试验 结果良好。 2重组人血小板生成素的研究 2．1I组人血小板生成蠢(rhTPO)衰达细胞株的构童 为引物。进行PCR反应。产物与载体质粒连接．经转化、筛选得到表达质粒，序列分析证 重组细胞株。 ’ 2．2重组人血小板生威素lshTPO)的实验童豆中试研究 通过对表达dsTPO组胞克隆的实验室和中试研究，确定了重组细胞高效表达的培养方法 以及目的蛋白的纯化方法和技术。利用先进的生物反应器进行重组细胞的高密度、商衰达培 一25— 养；利用合理组合的系列层析技术进行纯化。兰批连续生产、纯化结果表明，细胞表达量、 纯化收率、成品及原液检定等均已达到预期的要求。 应用5立升细胞培养罐连续培养3批，生产周期60一胁天。每罐平均收获100立升，表 达稳定。平均表达量为1万单位／毫升培养液。纯化收率为16—25％。每罐平均产量l万支 (15000单位，支)。 致。残余DNA含量、残余宿主蛋白古量、内毒素含量等均符合规程要求。 2．3t组人血小板生成素收床前药理、毒理研究 2．3．1t组人血小板生成素(㈣l药效学 细胞系增殖分化，促进外周血血小板的恢复，血小板的回升程度与dffPO剂量有一定的量效 关系。体外培养具有巨核细胞抗原表达的HEL和DAMI细胞系及正常人骨髓细胞表明：ru· 的结果表明rhTPO促进猕猴血小板数量明显增多时，其新生血小板聚集功能仍正常；血小板 呈数倍增多时，全血凝固状态有所增强。 2．3．2重组人血小板生成素(r唧)的一般药理研究 一般药理试验表明：d-TPO静脉给药剂量高于临床治疗剂量的100倍，对实验动物的神 经系统投有抑铆和兴奋作用。一般行为表现未出现异常。对心血管系统和呼吸系统也无明显 影响。 2．3．3重组人血小板生成囊(rhTPOl的毒性试验 动物无明显毒性反应。观察14天动物未出现毒性反应和死亡。体重增加．内脏病理组织学 3000倍．给药后动物无明显毒性反应。观察14天动物未出现毒性反应和死亡。体重增加， 病理组织学检查各主要脏器未见异常。 9 欲、体重、体温、血清十项生化和尿十项检测、Ⅱ导心电图、病理组织学检查等均与№组 无明显差别。 试验和人二倍体细胞染色体畸变试验结果均为阴性。 2．3．4 t组人血小板生成素I㈣)动物药代动力学研究 单剂量给药结果显示：皮下注射及静脉注射rh。肿后血药浓度与给药剂量大致戚正比。 血药浓度变化符合血管外一级吸收二房室开放模型。其主要药动学特点为消除比较缓慢， AUC与剂量基本成正比，全身清除率c【|相近，表明药物在体内的总过程基本符合线性动力 学。单剂量删伴随外周血小板(PLT)数相关地增高。PLT增高的最大反应和持续时问 与剂量相关。PI