冷击预处理提高甘蓝型油菜小孢子胚胎发生地研究.pdfVIP

冷击预处理提高甘蓝型油菜 小孢子胚胎发生的研究 顾宏辉1，Per Hagber孑，周伟军3 (1浙江省农业科学院作物与核技术利用研究所，浙江杭州，310021 2Sval§fWeibullAB．SW Laboratory，SE一26881，svd狮，Sweden； 嘶江大学农业与生物技术学院农学系．浙江杭州，310029) 摘要：胁迫是诱导小孢子培养胚胎发生的必需帚件。冷击预处理早已用于禾谷类 小袍子培养中，但极少用于芸苔属植物的小孢子培养。本文研究了在液体培养基中 冷击预处理花蕾对春冬性甘蓝型油菜、白菜和花椰菜小孢子胚胎发生的影响。与常 用甘蓝型油菜小孢子培养技术相比，冷击预处理能显著提高小孢子胚胎发生频率(提 高1．7倍)，但对白菜的效果较差，对花椰菜甚至有负作用a冷击预处理的适宜时问 为2。4d。此外。冷击预处理还能促进胚状体的生长发育，如提高胚状体的质量和加 快胚胎发生。当与换培养基处理结合时．冷击预处理的胚胎发生频率最高。通过进 一步改进提高，冷击预处理方法将在芸苔属作物育种上显现其应用潜力。 关键词：甘蓝型油幕；白幕；花椰菜；冷击预处理；胚胎发生；小孢子培乔 过去20年。小孢子培养技术已在芸苔属植物中取得了显著进展，尤其是在甘蓝型油菜 上【1]。其系统产生的双单倍体已广泛应用于芸苔属作物育种，以及其它诸如转基因、生物化学 和生理研究之中【“，但上述应用或研究均需要建立在高效的小孢子胚胎发生和胚状体生长发 育之上。 影响小孢子胚胎发生有诸多因素，如供体基因型、供体生理条件、小孢子发育阶段、培养条 件、培养环境和预处理等【3】。这些因素中，芸苔属作物小孢子培养往往需要有一个短时间的热 击才能诱导小孢子胚胎发生，尽管已有研究表明其它胁迫如低剂量7射线、乙醇或秋水仙碱能 代替热击“·“。与热击胁迫相比，玲击预处理方法极少用于芸苕属作物小孢子培养，但在禾谷 类小孢子培养中却极为重要L6’“。 在以往的研究中，冷击预处理对芸苔属小孢子胚胎发生的效果似乎十分矛盾。通过冷击 预处理花蕾或花序能显著提高甘蓝型油菜[”、受基因型影响的甘蓝【9J和大白菜的小孢子胚胎 发生[，“．甚至提高经超低温处理过的分离小孢子胚胎发生[11’；但也有报道对甘蓝型油菜【12】和 作者简开：顾宏辉(1甜9一)．男．斯扛宁蒗^．助矸．主要从事芸苔属作物遗传育种和生物技术研究。 △获二等奖 ·20· 白菜型油菜[13】胚胎发生的负面作用。冷击预处理完全不同的试验结论可能导致对其作用的 误解以及造成在芸苔属小孢子培养中的不当应用。 本研究试图评估冷击预处理对春冬性甘蓝型油菜、白菜和花椰菜小孢子胚胎发生的影响。 通过在液体培养基中冷击预处理花蕾取得了较好的试验结果。 1嫡祷与磊法 1．1供试材料和生长条件 共选用3个芸苔属种的9个基因型作供体材料，所有基因型已试验表明对小孢子培养反 地方品种宁渡茅山种，1个冬性花椰菜品种椰奇。 供体檀株生长在光周期16h、20／t5℃(昼／夜)、营养丰富的温室条件下。冬性材料在3—4 叶期时在4℃、弱光、光周期8h条件下进行春化处理8周。后供体植株盆栽于3L的容器中， 每天浇水1次，每周施含NPK的液体肥1次。在小孢子分离1周前．将植株移人12℃／106C(昼 ／夜)的人工气候室作小孢子培养备用。共10株作供体植株。 1．2小孢子培养 小孢子培养方法参照乃一等【141方法进行，并根据不同的芸苔属种类作相应变化。在花 序接近开花时，每次从主花序或分枝花序上随机选取处于单核晚期和双核早期的花蕾(2—6 mm长)9一12个。经Cevonimn(有效成分次氯酸钠5％)表面消毒15rain后，用无菌水洗涤3 r／m／n离 次。在JOmL的％一139坫】培养菠中轻轻捣碎。并经4D胛尼龙茆网过滤，滤液用750 心5 cm×1．5 (104个，取4ml小孢子悬浮液于6