桃茎尖培养中无性再生体系地研究.pdfVIP

264 园艺学进展 (第五辑) 桃茎尖培养中无性再生体系的研究 宋 刚 ‘林顺权2 吕柳新3 (，福建留学人员创业园管理中心，福州 35(002 华南农业大学园艺学院，广州 510642 3浙江大学园艺系，杭州310029) 摘 要 主要选用成年树 “玉璐”桃枝梢上的带腋芽茎段为外植体进行离体再生研究。重点 对影响桃茎尖培养过程中的两个主要因素，即外植体的成活率与分化率进行了探索。筛选出了适 合于 玉“蟋”桃茎尖培养的诱导培养基MS+0.2mgL-IBA+2.0t%-L-Zr+30mg-LAd+400m% L`W，分化指数可达53.9%;增殖培养基MS+0.2.gL-IBA十4.0,.g-L-46一BA，增殖系数可 达3.6;芽苗生长培养基MS+0.2mg-L-IBA+1.0mg-L-ZT+30mg-L-Ad+400mgL-LH,芽苗30 天可长高3.5m;生根培养基1/2MS+I.OmgL-IBA，生根率可达83.3%。初步建立了一个桃的 无性再生体系 关vim 茎尖培养;带腋芽茎段;无性再生体系 桃隶属蔷薇科 (Rosaceese)李属，原产我国，树体适应性强，结果早，见效快，栽培十 分普遍川。我国是世界桃生产大国之一，但由于长期采用嫁接繁殖，育苗周期长，影响了新 品种的扩大萦殖和推广速度;加之危害桃的病毒多达30种，病毒病给生产也带来了巨大的 经济损失，所以进行桃的茎尖培养研究，这不仅是一条苗木扩大繁殖的好途径，而且有利于 获得脱除病毒的整齐一致的苗木。此外，桃的无性再生体系的建立，也将为桃的遗传转化创 造有利条件。 桃茎尖培养研究已有近30年的历史，但在栽培品种上迄今未达到实用化的程度。Heuser (1972)最早开展桃茎尖培养，并获得愈伤组织;Feucht等 (1973)培养桃实生苗的茎尖培 养，也仅获得愈伤组织;Boxus等 (1974)从桃分生组织培养获得了芽;Skirvin等 (1977)培 养桃茎尖，首次获得生根苗;Loreti和Morini(1982)培养桃砧木 (GF677)的茎尖，实现快 速繁殖。我国自70年代末开始对桃茎尖培养进行探索[[2.31，杨增海等继试管实生苗的茎尖培 养获得成功后 (1984a)，栽培品种的茎尖培养也获得再生植株并有一定的增殖率 (1984b), 被认为 使“桃的茎尖培养繁殖在国内迈开了第一步”。意大利的Loreti等报道 (1991)他们成 功地快繁了700万株GF677桃砧木。可惜，国内外一直未能对栽培品种的茎尖进行快繁。 1993年，江虎军等复又对茎尖培养的技术进行研究。 本研究就是在他们研究的基础上，针对再生体系建立过程中的困难问题进行研究，并摸 索最适培养因子。我们已初步建立了一个桃的无性再生体系，为下一步的遗传转化工作奠定 基础。现将结果报道如下。 1材料与方法 1.1 材料 供试材料桃 (PnuwspersicaL.)的品种为 玉“露”桃，取自福建农林大学果树实验基地 宋刚等:桃茎尖培养中无性再生体系的研究 265 的健康成年树。 1.2 外植体的选择与处理 3月下旬，从健康的母株上剪取成年型的休眠枝条，此时花芽已开放，腋芽尚未萌动。 枝条先在4℃低温下预处理几个小时至过夜。4月下旬取材时，每一枝条上己展开4一6片小 叶，每片小叶长约1.5cm左右。所有材料均在消毒之前，经流水冲洗 卜2h，再经洗衣粉漂 洗1一2次后，剪取带有腋芽茎段和顶芽，在无菌条件下，用75%的乙醇浸泡30sec，然后在 0.1%的HgC12中消毒，并添加几滴吐温-20，不时地搅拌，最后用无菌水冲洗3一5遍。 1.3培养蓦 本研究先后共采用4种培养基:诱导培养基、增殖培养基、芽苗生长培养基和生根培养 基。所有培养基均加蔗糖3%，固体培养基加琼脂0.7%，半固体培养基加琼脂0.5%，其中 部分诱导培养基添加了相应浓度的头抱类抗生素 (如头抱唆琳呐，采用过滤灭菌)，芽苗生 长培养基均添加 《OmgL-LH。实验无特殊说明者均采用固体培养基。培养基配制按常规方 法进行，pH值调至5.8左右，在1.lkgcm-2,121℃下灭菌20min后，避光保存备用。 1.4 诱导培养 无菌条件下，仔细剥取茎顶芽1一2mm和带腋芽茎段0.5一LOcm，接种到诱导培养