TGF-β1和α-SMA表达与大鼠外伤性癫痫的相关性探讨.pdfVIP

史垦医J师逝金控经壁叠匡嘘筮金=箍盔屋全国岱塞盔金i金塞涎缝 ·219· TGF—131和仅一SMA表达与大鼠外伤性 癫痫的相关性探讨 陶武 谢延风石全红詹彦 张光伟 临床研究早已发现儿童m的发生率远较成人高，然而其发病机制仍未阐明…。近年发现，未成 和N．S注射幼年与成年大鼠皮层，通过对幼鼠枕大池注射TGF一131抗体进行干预，观察大鼠m发作 发病机制。 材料与方法 1．材料：S—D大鼠2周龄45只，体质量(25±5)g；2月龄30只，体质量(1804-30)g；由重庆医科 购自武汉博士德生物工程有限公司，单克隆即用型鼠抗人仅一SMA试剂盒购自北京中杉生物公司，硝 酸纤维素膜(上海普易生物技术有限公司)，抗B—actin单克隆抗体(美国SantaCruz公司)。Trizol、逆 转录和扩增试剂盒、引物合成(上海生物工程公司)。DNAMarker(广州威佳公司)。 3．方法：(1)分组及给药方法：随机将45只幼鼠和30只成年鼠分为五组，组一、组二是对照组，分 别含15只幼鼠和15只成年鼠。组三、组四为实验组，各含15只幼鼠和15只成年鼠。另设组五为干预 LS GH 组，含15只幼鼠。参照Buniatian3方法，对照组注射N．S 5一。 5山；实验组注射50mmol／LFeCl3 FeCl3 干预组幼鼠皮层注射50mmol／L 标：各组成功处理后2小时，连续观察6小时，记录每只大鼠典型发作总次数。(3)标本处理：观察结 束，枕大池穿刺取CSF 缓冲液lOOmL冲洗3次，将标本取适当大小装入微量离心管内，编号后同上清液置入一70℃冰箱内保 7；d—SMA上 一链、合成第二链、电泳分析等步骤。凝胶图像分析系统检测灰度，仅一SMA／GAPDH比值表示仅一SMA 法)、SDSPAGE电泳、考马斯亮蓝染色、转移及免疫显色等步骤。使用图像分析软件分别测定5组中a —SMA条带的灰度值，将条带灰度值与B—actin条带灰度值相比，得出统计数据。 3．统计学分析：数据应用面4-s表示，将实验所得数据值应用SPSSl1．5统计学软件包对数据进行 ANOVA，组间比较采用基于方差分析两两比较LSD法。 统计学处理，多组间比较采用one—way 作者单位：400016重庆医科大学附属第一医院神经外科(陶武现工作于重庆医科大学附属永川医院神经外科) ·220- 结 果 1．EIlSA结果：5组CSF所测TGF—B1值见表1。 表1 5组CSF中TGF—B1值比较(露士s，pg／m1) mRNA条带长度分别为487bp和750bp见表2。 组另U TGF—Bl 3．Western印迹法电泳结果：d—SMA的蛋白 幼鼠FeCl3组 ～¨兰： 质量为42ku，条带位于内参附近见表3。 一 成年鼠FeCl3组 ～～nm{_∥ 幼鼠N．S组 ～n妒 疫印记灰度值比值数据行统计学软件处理，结果 一 成年鼠N．S组 枷～垃Ⅲ护弭 干预组 脚～却m船 表达最高，在成年鼠N．S组中表达最低，差别具 有统计学意义(P0．05)。 0【一SMA 表2 mRNA灰度比值(厅=15，露±s)4．行为学观察结果：只有幼鼠FeCl3组和干 组别 a—SM