禽呼肠孤病毒σC基因的克隆和表达及ELISA抗体检测方法的建立.pdfVIP

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2017-08-17 发布于安徽
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禽呼肠孤病毒σC基因的克隆和表达及ELISA抗体检测方法的建立.pdf

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第二届全国禽病分子生物技术青年学者论坛论丈集禽呼肠孤病毒OC基因的克隆和表达及ELISA抗体检测方法的建立董嘉文1，孙敏华，李林林，胡奇林。 (1广东省农业科学院兽医研究所，广东省兽医公共卫生公共实验室，广东广州，510640) 摘要：将扩增得到的禽呼肠孤病毒(ARV)SI 酶切及测序鉴定，证明该基因片段为ARV oC摹因。将该基因亚克隆至pET32a(+)成功构建了表 mmol／LIPTG诱导5h得到最佳表达。达载体pET32a-oC。该重组质粒在大肠杆菌BL21中经1．0 发生特异性反应，表明其具有良好的反应原性。将纯化好的ARVoC蛋白作为包被抗原，确定了该方法的抗原最适包被浓度为2“g／mL，血清的最适稀释度为l：400。用建立的ELISA方法检测接种过ARV疫苗的65份临床血清样品，测得44份为阳性。阳性率为67．7％；未接种过的ARV疫苗 30份血清样品检测结果均为阴性。关键词：禽呼肠孤病毒，oC基冈，克隆与表达，ELISA ofELISAfor theoC antibodiesavianreovirus Development against using proteins intheEscherichiacoil expressed DongJia-wen，SunMin·hua,LiLin-lin，Yuan Qi·Iin· Jian—feng，Hu of of Veterinary (Institute Medicine，GuangdongAcademyAgricultureSciences，GuangdongOpen of Public 1 LaboratoryVeterinaryHealth，6uangzhou，50640) Abstract：TheoC ofARVS1133Was and wasclonedintothevector gene designedamplified，which Was and result identifiedrestriction revealed pMD-18T-Simple．Theplasmid by enzymesequenced．The thattheinsert WastheoC ofARV．Thenthe Wasinsertedintothe genefragment gene gene pET32a(+) thatfusion fusion andindicated vector Wasconstructed．Therecombinant expressionpET32a-oC protein Was inEco／iBL21 induced1．0mmol／LIPTGfor5hoursintheformofinclusion highlyexpressed by bodies．Theofrecombinantfusion moleculariS5