哌嗪雌酚酮对骨质疏松小鼠骨和子宫的影响_临床医学论文.docVIP

哌嗪雌酚酮对骨质疏松小鼠骨和子宫的影响_临床医学论文 哌嗪雌酚酮对骨质疏松小鼠骨和子宫的影响_临床医学论文 作者：张延娇 李青南 郑虎 翁玲玲 【摘要】 目的 研究新型雌激素——哌嗪雌酚酮（PE）对去卵巢骨质疏松小鼠骨代谢及子宫的影响。方法 将60只昆明种小鼠，体重30～35 g，随机分6组，正常对照组，去卵巢模型组(Ovx组)，Ovx+PE 0.5 mg/kg组，Ovx+PE 1.0 mg/kg组，Ovx+PE 2.0 mg/kg组，Ovx+雌酚酮（E）0.71 mg/kg组。去卵巢后连续灌胃给药42 d，处死小鼠后行骨代谢相关指标检测、骨组织胶原染色及子宫病理学检查。结果 PE能预防去卵巢小鼠的骨丢失，高剂量组有统计学意义（0.05），与模型组比较，中、高剂量组能够显著的提高去卵巢小鼠骨内羟脯氨酸的含量(0.01,0.05)；对单位骨重骨钙、骨磷含量无明显影响；与雌酚酮组比较，对骨质疏松小鼠子宫的作用较弱。结论 PE主要是通过提高骨组织胶原的含量维持骨量，对子宫表现出弱刺激作用。 【关键词】 哌嗪雌酚酮；骨质疏松；去卵巢；骨；子宫 　　绝经后妇女骨质疏松的发病率为50%，其病因主要是绝经后卵巢功能减退、雌激素水平降低引起骨质丢失。雌激素替代疗法(ERT)是防治绝经后骨质疏松最传统、最经典的方案〔1，2〕。然而，长期应用雌激素会增加乳腺癌和子宫内膜癌的风险。因此，寻找选择性高、副作用小的防治骨质疏松药物，成为目前新药研发的热点之一。哌嗪雌酚酮（PE）是一种新的雌激素衍生物〔3〕，既往采用骨形态计量学方法证实了其对大鼠骨丢失的预防作用〔4〕。本实验以骨质疏松小鼠为动物模型，通过对骨基质的分析及骨胶原排布的影响探讨PE对绝经后骨质疏松防治的疗效。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物及分组 　　雌性昆明种（KM）小鼠60只（本院动物中心提供），体重30～35 g，将小鼠随机分成6组：正常对照组(Sham组，5‰羧甲基纤维素钠)、去卵巢模型组（Ovx组，5‰羧甲基纤维素钠）、去卵巢+PE低(PE，Ovx+PE 0.5 mg/kg)、中(PE，Ovx+PE 1.0 mg/kg)、高剂量组(PE，Ovx+PE 2.0 mg/kg)和去卵巢+雌酚酮组(E组，Ovx+E 0.71 mg/kg)。对应组分别连续灌胃给药42 d，右心室采血，处死。 　　1.2 实验药品及试剂 　　PE（纯品），由四川大学华西药学院提供； 5‰羧甲基纤维素钠购于上海化学试剂厂；羟脯氨酸（Hyp）测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所；Direct Red 80购于Sigma公司。 　　1.3 方法 　　1.3.1 骨组织参数的测定 　　1.3.1.1 股骨湿重（BWW） 　　将软组织剥除干净的左侧股骨，于1/10万分析天平上测其湿重。 　　1.3.1.2 股骨干重(BDW) 　　取左侧股骨，除净附着骨上的肌肉和软组织，用AE240电子天平称量湿重后于80℃烤箱烘烤72 h至恒重，称量此时骨重可得出股骨干重。 　　1.3.1.3 骨Hyp及骨钙(Ca)、骨磷（P）测定方法 　　取左侧股骨，除净附着肌肉和软组织，于80℃烤箱烘烤48 h至恒重，然后将每份骨标本置于10 ml安瓿瓶中加入6 mol/L HCl 5 ml，乙炔火烧安瓿瓶口密封后置于烤箱中，108℃恒温消化24 h后取出过滤，取滤液，然后将滤液分成两份，一份以1∶10稀释后用ICP(电感耦合等离子体直读光谱仪)测定微量元素的含量，根据标准品含量及样品稀释倍数计算出骨中Ca2+、P的含量；另一份滤液以1∶10稀释，调pH值至7.0～7.4后，按照Hyp测定试剂盒方法用UV紫外分光光度计测定样品中Hyp吸光度，计算样品中Hyp含量。 　　1.3.2 骨胶原形态学观察〔5〕 　　脱钙骨制片：取右侧股骨，多聚甲醛液中固定72 h后，置于15%EDTA脱钙液中脱钙4 w（换新鲜EDTA脱钙液1次/w），脱钙后流水冲洗过夜，10%中性福尔马林液固定过夜，骨组织脱水，预浸蜡3 h，浸蜡3 h，包埋，修整蜡块后切片。各组的股骨下1/3段在矢状面石蜡切片，裱于明胶玻片上行天狼猩红(Direct Red 80)胶原染色。 　　1.3.3 子宫组织病理学检查 　　将各组雌性小鼠的每个双角子宫分别取上中段约1 cm组织，然后经过常规梯度酒精脱水，二甲苯透明后浸蜡、包埋，修整蜡块后切片。子宫采用横切面连续切片，切片厚度均为4 μm。HE染色步骤染色，中性树胶封片。在光学显微镜下观察不同组的子宫组织的变化。 　　1.4 统计学方法 　　数据以x±s表示，采用SPSS13.0统计软件分析，数据经正态性和方差齐性检验后，采用单因素方差分析(oneway的最小显著差法LSD进行组间比较。 　　2 结果 　　2.1 股骨代谢指标结果