外源性VEGF诱导的大鼠视网膜血管病变_临床医学论文.docVIP

外源性VEGF诱导的大鼠视网膜血管病变_临床医学论文 外源性VEGF诱导的大鼠视网膜血管病变_临床医学论文 【摘要】 目的：探讨外源性VEGF诱导的大鼠视网膜血管病变的特点。方法：大鼠120只随机分为正常对照组、 rrVEGF164低、高浓度组。不同时间行荧光素眼底血管造影、视网膜电图振荡电位、组织学检查。结果：高浓度组注射rrVEGF164眼从注射后10d表现为眼底后极部视网膜动脉局限性高荧光，2wk时表现为单个视网膜内核层毛细血管管腔窄小，内皮细胞肥大,管腔面积和细胞面积分别与自身对照眼、4，6wk比较，差异有显著性（P ＜0.05）。视网膜电图OPs总波幅2，6wk降低，分别与自身对照眼、4wk比较，差异有显著性（P ＜0.05）。结论：高浓度高频率注射rrVEGF164 诱导的大鼠视网膜血管病变主要表现有视网膜水肿，大血管扩张，内核层毛细血管管腔变窄、接近闭塞，内皮细胞肥大、增生，周边部玻璃体视网膜纤维血管样膜。 【关键词】 视网膜毛细血管 0引言 VEGF是最重要的促血管形成因子，组织缺血、缺氧是VEGF的启动因素。缺血性眼病的视网膜、视网膜下新生血管膜等均有VEGF的表达，眼内VEGF浓度明显升高[1]。目前有关VEGF的研究大多是离体拮抗外源性VEGF或在体拮抗内源性VEGF的药物抑制实验，而单独应用外源性VEGF进行动物实验，探讨VEGF诱导的视网膜血管病变的特点，国内外研究甚少。我们探讨外源性VEGF诱导的视网膜血管病变的特点，为进一步研究药物拮抗VEGF打下基础。 1材料和方法 1.1材料 Sprague-Daweley大鼠（中南大学湘雅二医院动物实验中心提供，雌雄各半，体质量200～240g）120只随机分为3组：正常对照组36只，不作眼内注射。VEGF低浓度组36只，实验眼（右眼）每次注射浓度为10mg/L 的rrVEGF164 4μL，自身对照眼（左眼）注射等量的0.1mol/L PBS。两眼均为隔天1次，共2次。VEGF高浓度组48只，实验眼每次注射浓度为100mg/L的 rrVEGF164 4μL，自身对照眼注射等量的0.1mol/L PBS。两眼均为隔天1次，共4次。分别于2，4，6wk时均作眼底检查后各随机选取6只作眼底荧光血管造影、6只作视网膜电图振荡电位检查，再各随机抽取6只处死作组织学切片、6只处死作透射电子显微镜观察。VEGF高浓度组剩余12只于12wk时处死，随机选取各6只行组织学切片、透射电子显微镜检查。 Topcon眼底照相机，视觉电生理诊断仪，正方测试格，玻璃毛细管，重组大鼠血管内皮生长因子（rrVEGF164，Sigma公司）， FITC-Dextran（Sigma公司）。 1.2方法 大鼠充分散瞳后，30g/L戊巴比妥钠溶液（1mL/kg）ip麻醉。结膜囊表面麻醉，眼科手术显微镜下用30#B-D针头于背侧角膜缘后1mm处刺穿眼球壁后立即出针，角膜缘行前房穿刺，消毒剪刀将自制玻璃体腔微量注射针针尖剪去，暴露开口。10μL加样移液器抽取rrVEGF164 或PBS 4μL注于消毒的点样纸上。自制玻璃体腔微量注射针立即吸取。沿预先穿刺好的针孔处以45～50°的角度进入眼内并缓慢注射，停留约15s后拔针。术眼涂眼膏，术后3d用3g/L诺氟沙星滴眼液滴眼，2次/d。注射rrVEGF164或PBS前、后，出现玻璃体出血者不纳入实验对象。散瞳后，ip麻醉大鼠，结膜囊表面麻醉。暗适应30min，暗红光下安放3个电极，小号银针柄端连接于电极线末端后，角膜电极插于上方周边部角膜基质层，参考电极置于两眼连线的中点皮下，地电极置于同侧耳根皮下，黑色胶纸遮盖未检查眼。根据国际临床视觉电生理学会制定的视觉电生理标准化方案（1994年），设定刺激参数,双眼分别记录视网膜电图振荡电位(electroretinographic oscillatory potentials, ERG-OPs)。散瞳后眼底荧光血管造影，鼠尾静脉注射50g/L FITC-Dextran 1.0mL，固定动物，注射造影剂后5s，各个方位眼底照相，每次拍片间隔5～10s，持续3min，选择性拍片直至注射造影剂50min。剥离视网膜，常规电镜制片，每只大鼠每眼随机观察2个铜网，每个铜网随机照相2张。同一组、同一眼别的样本分散，使各组样本容量达24张。对视网膜内核层单个毛细血管管腔面积、血管内皮细胞面积进行形态计量，采用正方测试格计数法测量视网膜内核层单个毛细血管管腔面积、血管内皮细胞的面积。 统计学处理：所有数据均用均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS for Windows 11.5统计软件处理。资料正态检验，方差齐性检验后，单因素方差分析，两因素方差分析，P＜0.05为统计学差异有显著性。 2结果 2.1直接眼