姜黄素体外诱导人乳腺癌MCF7细胞凋亡作用_临床医学论文.docVIP

姜黄素体外诱导人乳腺癌MCF细胞凋亡作用_临床医学论文 姜黄素体外诱导人乳腺癌MCF细胞凋亡作用_临床医学论文 作者：孙黎 刘正泉 罗强 薄爱华 【摘要】 目的:观察姜黄素对人乳腺癌MCF细胞(简称MCF细胞)凋亡的诱导作用。方法:不同浓度姜黄素(0.048，0.056，0.064，0.072，0.080μmol/L)作用于MCF细胞24h,采用CCK法检测其对MCF细胞的生长抑制作用;琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡结果。结果:经上述不同浓度姜黄素诱导24h后，MCF细胞生长抑制率分别为17%、28%、48%、50%及55%;琼脂糖凝胶电泳显示出DNA梯形条带。结论：姜黄素对体外培养MCF细胞的增殖有明显的抑制作用并可诱导其细胞凋亡。 【关键词】 姜黄素;人乳腺癌MCF细胞;细胞凋亡 　　【ABSTRACT】 Objective:To study the effects of Curcumin inducing apoptosis of MCF different contentrations (0.048，0.056，0.064，0.072，0.080μmol/L) effected on MCFlectrophoresis. Results:By these concentrations Curcumin inducing,24h later,growth inhibition of MCF7 cells was respectively 17%,28%,48%,50% and 55%;Agarose gel electrophoresis showed DNA ladder electrophoresis.Conclusion:MCF7 cells were inhibited apparently and induced apoptosis by Curcumin in vitro culture.Furthermore,it provided important basis for the treatment of malignant tumors(breast cancer,etc.)and the study for mechanism of apoptosis. 　　【KEY WORDS】 Curcumin,Human Breast Cancer MCFsis 　　姜黄素是从姜科植物的根茎姜黄(Curcuma aromatica,Salisb.)中提取的一种植物多酚，具有抗炎、抗氧化、抗凝、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤等药理作用，对多种肿瘤细胞系均有明显的凋亡诱导作用，是一种理想的细胞凋亡诱导物[1]，其抗癌范围很广，具有广阔的开发前景。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料及仪器 　　MCF细胞株由北京肿瘤研究所遗传室提供,本院实验中心细胞室传代、冻存;CCK为上海同仁化学产品;RPMI培养基为美国Gibco公司产品;胎牛血清购自天津市川页生化制品有限公司;琼脂糖,100bpDNAmaker为北京六和同公司产品。其他均为国产分析纯试剂。美国SpectraMax M2/M2e多功能微孔检测系统。 　　1.2 方法 　　1.2.1 MCF细胞培养 复苏MCF细胞于50mL培养瓶中,RPMI培养液(含100mL/L胎牛血清，100万U/L庆大霉素)37℃,50mL/L CO2培养,待细胞生长至对数生长期加入不同浓度姜黄素处理。 　　1.2.2 CCK法检测姜黄素对肿瘤细胞的抑制作用 取对数生长期密度为2×105/mL的MCF细胞，接种于96孔培养板上,100μL/孔。用培养液将姜黄素稀释成0.080，0.072，0.064，0.056，0.048μmol/L 5个不同浓度，并分别加入96孔培养板(100μL/孔),每组设4个复孔，对照组加入等体积培养液，培养24h。实验终止前4h每孔加入CCK后以酶标仪检测吸光度(A490值),按公式计算MCF细胞抑制率。抑制率(%)=(1实验组平均A490值/对照组平均A490值)×100%。 　　1.3 琼脂糖凝胶电泳分析 取培养至对数生长期MCF细胞(密度为1×106/mL)分别接种于6只50mL的培养瓶,1.5mL/瓶,实验组分别加入上述不同浓度的姜黄素悬液1.5mL,对照组加入1.5mL培养液。培养24h后,1500rpm/min离心,收集MCF细胞,用PBS(0.01mol/L pH7.4)洗涤3次,最后1次移入1.5mL EP管中,加裂解液615μL，70℃水浴振荡15min,重复2次,离心取上清液500μL加1000μL的无水乙醇使DNA析出,离心后用20μL TE缓冲液(pH7.4)溶解DNA。电泳前,用RNA酶(10g/L)消化30min。2%琼脂糖凝胶电泳60mi