禽流感活病毒的高灵敏检测及其侵染宿主细胞动态过程的可视化.pdfVIP

第28卷增刊 分析试验室 V01．28．S呷p1． 200【)年：1月 Chinese I’f．LnalvsisLahnraIorv ：009一ll Journal 禽流感活病毒的高灵敏检测 及其侵染宿主细胞动态过程的可视化 刘书琳1，赵蔚1，张万坡2，谢敏1，王汉中2，庞代文¨ (1．武汉大学化学与分子科学学院，生物医学分析化学教育部重点实验室，病毒学国家重点实验室，武 汉430072；2．中国科学院武汉病毒研究所，病毒学国家重点实验室，武汉430071) 摘要：建立了基于靶向纳米生物探针的禽流感活病毒快速高灵敏检测新技 术，并结合单粒子示踪技术实时监测了单个禽流感病毒粒子侵染宿主细胞的动 态过程。本研究不仅为国防、商检、出入境检疫、医院检验等提供准确快速的 检测手段，还可为研究禽流感病毒的致病机理提供分析方法，对应对突发公共 卫生事件、构筑国家公共安全体系有重要意义。 关键词：禽流感病毒；纳米探针；高灵敏；检测；单颗粒；可视化 随着，SAILS、艾滋病、H1N1流感等传染病的1．3实验步骤 频繁爆发，我们急需发展新的病原体检测方法用 将磁球与H_gN2表面HA的抗体偶联，富集并 于有效控制传染病的流行。早检测、早隔离、早治 分离HgN2病毒，分离后的病毒，与生物素(biotin) 疗是降低传染病发病率与病死率的有效策略，其 化的抗体相互作用，并用偶联了链酶亲和素(SA) 中早检测及快速检测是对病原体检测技术提出的 的QDs对病毒进行标记。将标记了量子点的病毒 严峻挑战，早治疗则需要依据病毒的致病机理对 与宿主细胞孵育，在Andor激光共聚焦活细胞快速 症下药。然而，现有病原体检测技术体系和方法， 成像系统上监测禽流感病毒侵染宿主细胞的动态 如病原微生物分离．培养．检测技术、免疫学检测技 过程。 术、核酸检测技术等，离高灵敏、高特异、快速检 2结果讨论 测的要求还有距离。现有的对病毒致病机理的研 2．1禽流感病毒的检测 究也多局限于细胞生物学研究，因此，建立用于 荧光显微镜的结果显示，被磁球富集分离的 直观监测病毒侵染宿主细胞动态过程的新技术对 了解病毒的致病机理至关重要。随着纳米功能材 后，可以被量子点识别。用其他禽类病毒做对照 料的迅速发展，功能化纳米生物探针得到了越来 实验，荧光场下观察不到量子点荧光。此外，磁球 越广泛的应用1。因此，为了达到对病毒靶向检测 ．病毒一量子点复合物中量子点的荧光光谱可通过 和有效治疗的目的，本研究建立了基于靶向纳米 荧光光谱仪检测。我们以灭活的I-ISNl病毒和不含 生物探针的病毒检测和可视化监测新技术，实现 任何病毒的空白样品作对照，结果显示只有当目 了HgN2亚型禽流感活病毒的高灵敏检测及其侵标病毒H9N2被磁球捕获时，并被量子点识别，才 染宿主细胞动态过程的可视化监测。 会出现量子点的特征发射峰，而对照实验中，使 1实验部分 用其他病毒或不加病毒时，由于不能形成磁球．病 1．1试剂与仪器 毒．量子点的复合物，所以也不会出现量子点的荧 Amino-Adembeads磁球，HA的抗体，偶联了链光发射峰。基于荧光光谱仪对量子点荧光信号的 酶亲和素(SA)的QDs。 检测还可以用于对H9N2活病毒的半定量分析。 Andor激光共聚焦活细胞快速成像系统、荧光2．2禽流感病毒侵染宿主细胞动态过程可视化 分光光度计。 我们成功地利用量子点标记了禽流感H9N2