决明方对营养性肥胖大鼠脂肪组织G0S2和ATGL表达的影响.pdfVIP

决明方对营养性肥胖大鼠脂肪组织GoS2和ATGL表达的影响 文秀英洪士聪 华中科技大学同济医学院附属梨园医院中西医结合科，武汉430077 摘要目的：近期研究发现Gos2和ATGL是影响脂肪分解的关键因子。 我们观察决明方对营养性肥胖大鼠脂肪组织中GOS2和ATGL表达的影响， 以探讨决明方在脂肪分解中的作用。方法：雄性SD大鼠随机分为正常组7只， 模型组7只，决明方组7只，决明子组7只。检测大鼠血清FBG、TG、T-CH、 HDL．C、LDL，C、ATGL及MS。观察脂肪组织病理学改变，免疫组化分析脂 肪组织中G。S。、ATGL水平。取大鼠脂肪组织用RT-PCR法和WesternBlot检 测G。S。、ATGLmRNA和蛋白的表达水平。结果：与模型组比较，决明方组大 减小(P0．01)。决明方组脂肪组织中GOS。的mRNA和蛋白表达较模型组明显 脂肪组织GOS。表达，上调ATGL的表达，可通过促进脂肪分解而起到减肥的 作用。 肥胖症是体内脂肪积聚过多而使体重增加的一种代谢性疾病，肥胖发病 的分子生物学机制是脂肪生成多于脂肪分解。研究显示，脂肪分解过程中某 些重要基因的表达异常会引起脂肪分解减慢，导致肥胖。近期研究发现，G0／G1 switCh 期开关基因．2(G0／Gl gene2，G。S。)与脂肪甘油三酯脂肪酶(adipose tfiglycefidelipase，ATGL)是参与脂肪分解的主要基因。脂肪分解按照ATGL， 激素敏感性脂肪酶(HSL)，单甘油三酯脂肪酶(MAG)的催化顺序依次进行， ATGL是脂肪组织水解TG第一步反应的限速酶。G。S。也在脂肪分解中起重要作 用，是A1附L的负调节因子。 我们前期研究显示决明方能促进能量消耗而达到减肥的作用。本研究采 用高脂饮食建立营养性肥胖大鼠模型，研究决明方对SD营养性肥胖大鼠的减 肥作用，并观察其对脂解基因G。S。和ATGL表达的影响，以探讨其减肥机制。 材料与方法 L中药制各 决明方由草决明和姜黄等按照一定比例组成，加入10倍体积蒸馏水，浸 泡12 h后，煮沸3次，每次2 h，静置后过滤，浓缩至含生药1．59·m11的混合 药液，4C保存备用。决明子用同样方法，浓缩至含生药0．59．ml。1的药液。 2．动物模型的建立、分组及处理 3周龄SD大鼠，SPF级，雄性，30只，体重130．160克。适应性喂养一 周后，随机将大鼠中的7只作为正常对照组，喂以基础饲料；另23只用于建 立营养性肥胖模型，喂以高脂饲料。 4周末造模大鼠体重比正常组大鼠体重增加20％，确定为营养性肥胖大 鼠，未达到此标准的大鼠舍弃。将造模成功大鼠随机分为：模型组7只，决 明方组7只，决明子组7只。每日上午8：30开始灌胃给药，决明方组每只大 鼠给予决明方水提液59生药·kg-1·d～，决明子组给予决明子水提液1．59生 药·kg～·d～，模型组及正常组给予等量蒸馏水。 h)， 给药12周末于上午8时称重，尾静脉采空腹血(夜间禁食时间12 分离血清，用于测糖脂代谢指标；最后处死大鼠，测量心包、肾周、后腹膜 及附睾脂肪含量，称量总湿重作为内脏脂肪湿重，计算体脂比=内脏脂肪湿重 ／体重×100％；取固定部位脂肪组织，4％多聚甲醛溶液固定，用于作病理观 察；其余脂肪组织移至．80℃冰箱冻存备用。 3．血清糖脂代谢指标与ATGL、INS含量的测定 取血清200I．tL在全自动生化仪上检测大鼠空腹血糖(FBG)、甘油三酯 用ELISA方法检测血清ATGL和胰岛素水平(INS)。 4．脂肪组织病理学观察及免疫组化分析 取脂肪组织，经4％多聚甲醛溶液固定24h后，石蜡包埋切片，常规HE 染色。 J 免疫组化技术检测脂肪组织中ATGL和GoS。的表达，并用美国Image 图像分析软件半定量分析ATGL和G。S：的平均灰度值。 mRNA的表达 5．RT-PCR检测脂肪组织ATGL和GOS2