连续性血液净化对多器官功能障碍幼猪T辅助细胞免疫功能影响的机制研究.pdfVIP

·205· 连续性血液净化对多器官功能障碍幼猪T辅助 细胞免疫功能影响的机制研究 张建赵醴钱娟杨燕文任宏胡肖伟李璧如王莹 (上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心200127) 4℃染色30mill，再加anti-FITCbead8(miltenyi 多器官功能障碍(MODS)是临床常见的危重症，是以 biotee)，2— 免疫系统的过度炎症反应，免疫失衡相互作用共同导致的 8℃孵育15mill，加入MACS缓冲液300g离心10mill。用 一系列复杂病理改变，其救治困难，病死率高，采用传统的 500山MACS缓冲液重悬，MS柱(miltenyibiote,c)预先用 液体复苏，血管活性药物治疗，病死率仍在50％一70％…。500一MACS缓冲液处理，把重悬的细胞过柱子，用MACS 国内外近年来采用持续血液净化(cvv皿F)应用到脓毒缓冲液洗3遍，再把吸附在beads上的细胞打下来，即阳选 出CI)4+T细胞。 症-MOD$的救治，取得了较为良好的效果【2。3】。CVVI-IDF 能够去除MOD$患者中某些炎症细胞因子，如球№、1．5 TNFo【、1I,-1、IL-6、IL·12，皿_4、m-lO，特别是其初始水平比 50 较高的时候¨qJ。目前已知Thl／Tn2平衡在MOD$中起C02孵箱培养3d，后5h用PMA rig／m1，innomyeln 500 主要作用，检测各自细胞因子水平来确定T细胞亚群的功 rig／m1(sigma)刺激，最后3 h再加人Golgiplug(BD 能，区别炎症反应过度或免疫抑制饽j。因而，建立MOD$ 动物模型，分离纯化外周血T细胞，检测其在体外培养后 FCS)洗l遍，450g离心5mill后弃上清，加入anti—CD4 促炎和抑炎因子的水平，反应T细胞的功能状态，有助于 了解MODS动物模型的免疫状态。 固定液(BD rain，用破膜固定缓冲 pham血gen)室温放置30 1材料与方法 液(BD PE(BD pharmingen)洗两遍，分别加入anti-IFN andD Arc(R 1．1实验动物与分组健康、杂种幼猪24只，雌雄兼用，pharmingen)，anti一儿_4systerm)于室温染色 30 体质量7．0一lO．0kg，由医学院实验动物部提供，随机分为 rain再洗涤后进行流式细胞仪(BDCaliber)检测。 对照组(n=12)，干预组(n=12)。 1．6培养上清收集5×105／孔CD4+T细胞于96孔圆底 I．2模型制作氯胺酮麻醉，连接Pltilips医学监护仪，气管 d 后收集上清一20℃冻存。 插管连接纽邦200呼吸机。工作参数：A／C；PIP：10锄1-120