免疫组织化学法检测北京地区牛肝脏中戊型肝炎病毒抗原.pdfVIP

动物医学进展，2010，3；(S)：55—58 in Medicine Veterinary Progress 免疫组织化学法检测北京地区牛肝脏中戊型肝炎病毒抗原 尹 君，余锐萍’，李睿文，孙 泉，毛晶晶，于 品，吕东强，潘亚涛 (中国农业大学动物医学院，北京100094) 摘 宰牛血清样品。肝脏样品经戊二醛一多聚甲醛固定，包埋，切片，最后进行HE及免疫组化染色。肝脏HE染 色结果显示，大多数的肝脏中均出现炎性细胞浸润及纤维组织增生。免疫组织化学染色结果显示，在49例 153)。血清样品HEV 份屠宰牛血清样品检出阳性样品2例，占3．33％。 关键词：戊型肝炎病毒；免疫组化；牛肝脏 中圈分类号：$854．43 文献标识码：A 戊型肝炎自1980首次在印度流行以来，世界各有限公司。 地相继出现群发及散发病例报道。戊型肝炎经消化 1．2方法 道传播，总致死率不足I％，但孕妇感染后死亡率可 1．2．1组织处理犊牛和屠宰牛经颈静脉放血致 死，开膛后，取出肝脏并迅速于肝最小叶剪下3em 高达20％以上，严重危害人类健康[1]。随着Meng X ×3 J发现猪血清中存在猪戊型肝炎(SHEV)野毒株cm组织块，置于戊二醛一多聚甲醛固定液固定。 以来，各国科学家相继在禽类、鹿、野猪等动物均检 1．2．2切片及染色按常规石蜡切片制作技术制 测出戊型肝炎毒株rz-s]。近年来研究表明，包括啮作连续切片，分别进行HEV免疫组织化学染色、苏 齿类、牛、鹿、马、狗、猫等多种动物中均检测出了戊 木素一伊红染色。苏木素一伊红染色按常规方法进行， 型肝炎IgG抗体，说明这些动物可能都是戊型肝炎免疫组织化学染色方法按试剂操作说明书进行。阴 的传染源[．]。本观察采用ELASA和免疫组化方法性染色对照不加一抗。 对2月龄犊牛及屠宰成年肉牛的血清和肝脏中戊型 1-2．3免疫组织化学染色结果的判定 在显微镜 肝炎抗原进行了检测，为深入研究戊型肝炎的感染 下，HEV免疫组织化学染色阳性反应信号为棕红色 途径及病毒在动物体内的分布定位提供一定的科学 或棕黄色团块状或颗粒状。 依据。 1．2．4血清HEVELASA检测按说明书步骤操 1材料与方法 作。 1．1材料 2结果 1．1．1肝脏49例犊牛肝脏样品和34例犊牛血2．1 牛肝脏HEV免疫组化检测结果 清样品采自北京某奶牛场2月龄淘汰荷斯坦犊牛， 在被检测的49例2月龄犊牛肝脏中，阳性检出 出生后即单独隔离分别饲养。153例成年牛肝脏和 60例成年牛血清采自河北某屠宰场，以肉用黄牛为 仅为13．7％(20／153)，结果见表1。 主。 2．2牛肝脏中HEV抗原的分布定位 1．1．2试剂兔抗人HEV多克隆抗体(一抗)，购HEV免疫组化染色切片显微镜观察可见， 自北京博奥森生物有限公司；通用型二抗及其它免 HEV阳性反应信号主要存在于肝细胞的细胞浆中 疫组化试剂购自北京博奥森生物有限公司；猪戊型 及肝细胞核内。在被检测的49例2月龄犊牛肝脏 肝炎ELASA检测试剂盒，购自北京万泰生物药业 收稿日期：20lO一04-06 基金项目：国家自然科学基金项目 作者简介：尹君(198l一)，男，硕士，主要从事人畜共患痰病研究。*通讯作者 56 动物医学进展2010年第31卷增刊(总第202期) 表1牛肝脏中HEV抗原免疫组化检测结果 中，阳性信号主要呈现散在性分布，仅在肝被膜附近 Table1 TherIesult$ofHEV detec- antigenimmunohistochemistry