产漆酶菌株筛选与其酶性质研究.pdfVIP

进作用，是提高白腐菌漆酶活力的有效途径。因此进一步研究木质素代谢中间产物对白腐菌漆酶合成的诱 导作用机制以及不同种属菌株之间的相互作用机制不仅具有重要的理论意义，而且在寻求代价昂贵的藜芦 醇等代用品，降低生产成本上具有实际意义。 产漆酶菌株筛选及其酶性质研究+ 王宣磊 (山东菏泽高等师范专科学校生物系山东菏泽274015) FUNGIAND oF YIELDLACCASEPRoDUCING SCREENINGHIGH LACCASE PRoPERTIESoF Yilei Wang Teachers ofrieze college,Heze,Shandon9274015) (BiologyDepartment 摘要：通过Bavendamn氏反应和液体发酵实验筛选出漆酶高产菌株，并对其产酶条件和酶活性 进行了研究。结果表明7l株实验真菌中有64株Bavendamn氏反应呈阳性，且阳性菌株都具有 漆酶活性；不同菌株产酶培养基最适碳源、氮源不同，采绒革盖菌以淀粉为碳源干酪素为氮源， 毛栓菌以麦草粉为碳源硫酸铵为氮源，有利于酶的分泌：不同来源漆酶性质不尽相同，采绒革盖 菌漆酶晟适酶解温度为25℃，最适酶解pH值为4．6，毛栓菌则分别为30℃和pH4．o；K+、zn2+等离 子对两种漆酶均有激活作用，A矿则能明显抑制漆酶活性。 关键词：漆酶筛选采绒革盖菌毛栓菌 漆酶广泛存在于真菌特别是担子菌中，是一种含铜的酚氧化酶；它具育广泛的底物作用范围，可以氧 秦小琼等，1996)。本文就此做了些探讨，以便为漆酶在造纸工业和环保工业上的应用提供一定的参考。 1材料和方法 1．1材料 供筛选的真菌菌株分别来自山东大学、四川大学、山东师范大学、三明真菌研究所、上海农业科学院 食用菌研究所、本系食用真菌室，其71株。 1．2培养基和培养方法 1．2．1综合马铃薯固体培养基 1．2．2 6．4的麦芽汁中加入2％的琼脂和O．2％的没食 Bavendamn氏反应培养基在稀释到10．15波美度，pH ‘山东省科委科研基金资助项1；1(971164805) ．280- 子酸。 1 2．3液体培养基综合马铃薯固体培养基去掉琼脂，加入O．5％的酵母膏。 1．2 4C，恒 温振荡培养。 1 2．5酶液制备液体培养的第5和第8天各取样1次，4000rpm离心15min，上清液即为粗酶液，纯化后冰 箱保存备用。 1．3酶活测定见王宜磊(1998)。 2结果与讨论 21漆酶高产菌株的筛选 21 1初筛接待测菌于Bavendamn氏反应培养基平板中央，培养lO天左右，观察菌落周围有无褐色环带， 发现7l株真菌中有64株呈明显的阳性反应，从中选出强阳性菌株15株进行液体复筛。 21 2复筛液体发酵实验(表略)可知．不同菌株漆酶活力有较大差异，其中采绒革盖菌、毛栓菌和多 孔菌3株菌漆酶活力较高(分别为351、368、331“mL)，其余菌株较低。前两株菌供做下面实验。 2．2产酶条件实验 2．21碳源实验在液体培养基中分别用待测碳源(半纤维素、木质素、CMCNa、麸皮、麦草 粉、淀粉、麦芽糖、麦芽粉)代替葡萄糖，培养8天后测定漆酶活性，结果毛栓菌以麦草粉为碳源有利于 漆酶的分泌，而采绒革盖菌则以淀粉为碳源能产生更多的漆酶(表略)。 2．22氮源实验由于毛栓菌以麦草粉为碳源时更有利于漆酶的分泌， 所以氮源实验时以麦草粉作固定碳 源：在液体培养基中以麦草粉代替葡萄糖，以待测氮源(大豆粉、蛋白胨、尿素、干酪素、硫酸