临床相关毛孢子菌生物学特性地研究.pdfVIP

临床相关毛孢子菌生物学特性的研究 北京大学第一医院皮肤科(100034)李厚敏刘伟万哲 李若瑜 近年来，随着广谱抗生素、皮质类固醇激素、免 检测不同菌株对不同糖的同化反应来鉴定菌株。 疫抑制剂等的广泛应用，器官移植、介入性诊疗等新 ITS区序列测定：将上述菌株接种于PDA斜面 型技术的深入开展，加上艾滋病的流行，机会性真菌 上在28℃培养5d。用氯化苄法提取基因组DNA； 感染呈逐年上升的趋势；除了念珠菌病、曲霉病等常 然后以聚合酶链反应(PCR)扩增核糖体DNA的内 见的真菌感染外，由非念珠菌属酵母菌所致的感染 转录间隔一区、二区以及其间的5．8s核糖体DNA， 在免疫受损人群中13渐增多，而且病情严重，毛孢子 菌病就是其中之一。毛孢子菌病是指由毛孢子菌引 ATGC．3 3’，rIs4：5-TCCTCCGCTrATIGAT7；PCR反应 起毛发、指甲、皮肤甚至全身系统性感染的一类真菌 体系为50 mmoY m，包含引物20pmol，dNTP$各2．5 病，能够引起人类感染的常见致病菌种主要有阿萨 mmol／L DNA聚合酶1u，10×PCR缓冲液(100 L，Taq 希毛孢子、皮毛孢子、皮瘤毛孢子星形毛孢子以及倒 mmol／L mmol／L Tris·HCl，20 MgCl2，500KCl，1．0％Tfi- 卵型毛孢子等。尽管毛孢子属都可以形成相似的关 50 tonX一100)5出以及菌株基因组DNA ng；扩增的 节孢子，但对于种水平的鉴定并没有帮助；根据文献 条件为：95℃变性5min，95℃变性308，58℃退火30 报道，不同种的毛孢子菌对抗真菌药物的敏感性差 s，72℃延伸1rain，共30个循环，最后72℃延伸10 ’异有明显意义，譬如阿萨希毛孢子菌对两性霉素B min；PCR产物用玻璃奶试剂盒进行回收纯化后，进 敏感而皮肤毛孢子菌对其耐药，因此将毛孢子菌鉴 行直接序列测定；所得序列通过核苷酸的BLAST程 定到种水平，对于合理选择抗真菌药物，有效治疗毛一 孢子菌感染具有重要的意义。 自2001年国内首次报告毛孢子菌的播散性感 染以来，有关毛孢子菌病的报道日渐增多；但是，人 对。 们对于毛孢子菌特性的了解仍然较少，毛孢子菌属 4．体外抗真菌药敏试验：参照美国国家临床实 的鉴定方法和毛孢子菌病的诊断手段还需进一步完 验室标准化委员会(NcCLS)推出的《酵母菌液基稀 善。我们对于本院真菌室及真菌病研究中心所保藏