蚕蛹中促进糖酵解作用活性因子地研究.pdfVIP

蚕蛹中促进糖酵解作用活性因子的研究+ 张明春韩克勤张嫒 (天津商学院制药工程系 天津300134) 摘要： 本文以鲜蚕蛹为原料，用生化方法从中提取促进糖酵解作用活性因子。将提取的 蚕蛹蛋白组分经索氏提取法脱脂后，用胰蛋白酶进行水解，酶用量0．5％，温度50。C，酶解时间 5h。得到的酶水解液各组分用PEG一磷酸盐双水相系统进行萃取，经生物活性检测，有一分子量 7600含铬蛋白组分有促进糖酵解作用。 —u—————，．．．一一一一 0前言 糖尿病在中医上归为“消渴症”，而《本草纲目》中有“蚕蛹煎汁饮，止消渴”的记载。 蚕蛹系传统中药，是蚕蛾科桑蚕的蛹。《本草纲目》、《日华子本草》、《东医宝鉴》、《医林纂要》、 《圣惠方》、《圣济总录》等古代医药经典著作中均有详细记载。蚕蛹具有生津止渴、消食理气、 镇惊、壮阳、和脾胃、祛风湿、长肌退热等功效，用于治疗糖尿病、虚损、小儿疳瘦、心血管 疾病、慢性肝炎、肾阳不足等疾病。蚕蛹蛋白中含有18种氨基酸，且含有人体所需的8种必需 氨基酸，另外．干蚕蛹中还含一定数量的微量元素，有K、Na、Ca、Sg、P、Fe、Mn、Cr等。现 代医药学研究证明，蚕蛹蛋白水解液对四氧嘧啶模型小鼠具有明显的降血糖作用而对正常小鼠 无影响。我们研究小组探讨了蚕蛹蛋白水解液中具有降血糖作用的组分，我们用微生物发酵法 对其活性进行检测，其中一分子量为7600的含铬蛋白组分具有促进糖酵解作用。所做的实验研 究尚未见报道。 1 实验 1．1实验材料 新鲜蚕蛹，吉林省蚕业科学研究所提供。 1．2实验方法 1．2．1防止蚕蛹蛋白褐变研究： 新鲜蚕蛹去皮后为淡黄色，几分钟内就会发生严重的酶促褐变，可采用加热的方法钝化酶． 防止褐变。但由于蚕蛹蛋白以球蛋白为主．受持续高温作用时空间构型解体，有秩序的螺旋分子 内部的一些非极性基团暴露在分子的表面，因而降低了蛋白质的溶解性，促使蛋白质分子间相互 i 结合而凝结，使蛋白质沉淀，故加热时间要尽可能短。新鲜蚕蛹去壳，在90C，3mn．即可有 效地钝化酶．防止发生褐变，再用10％的盐酸调pH至4．5左右，静置12小时(隔夜)。用离心 机离心(4000转Imin，10min)，弃去上清液，沉淀，干燥，得蚕蛹粗蛋白粉。 112．2脱脂方法研究 蚕蛹石油醚冷浸提法与索氏(Soxhlet)提取法比较研究 将蚕蛹粗蛋白用索氏提取器提取，在恒重后的定量瓶中加入213以下的石油醚，恒温水浴 在60℃，连续加热12小时，提取后回收石油醚。 将粗蛋白粉加入等量的石油醚．冷浸提取多次，至溶液为无色。分析索氏脱脂法与石油醚 冷授提法两种方法提取的产品，索氏提取脱除脂肪率高．所得蚕蛹蛋白较纯．外观颜色好。但 由于索氏提取时间较长，易影响蚕蛹蛋白的活性，所以选用沸程在30～60的石油醚或其他沸程 低的有机溶剂。石油醚冷浸提法则提取脂肪，脱除脂肪不完全，蚕蛹蛋白外观颜色发黄。 1．3酶解实验 50) 1．3．1材料与试剂：自制脱脂蚕蛹蛋白粉，胰蛋白酶(新疆生化研究所生化厂1：2 1．3．2．实验方法 酶作用量：0．5％：酶解固液比：20：70；酶解温度：45C；酶解pH：7．0 蛋白水解液。 1．4PEG一磷酸盐双水相萃取实验 蛋白含量测定用Folin一酚法．用不同PEG一磷酸盐双水相纯化酶解液各组分，得到K值不同 组分。PEG一磷酸盐双水相萃取实验： pEG 磷酸盐 C：mol／L) Cb{mol／L) K l 18％ 11％ 0．935 0．75l 1．245 2 17％ 11％ 1．029 0．650 1 583 3 16％ 11％ 1．201 0．988 1．216 4 15％ 11％ 0．902 O．901 1．001 5 14