RAPD技术在粘质沙雷菌分型探究中的应用.pdfVIP

NCl M2004 论文汇编 CCCCLM 体均为阴性。服用免疫抑制剂的病人中，对16例患者多份血样作 珠茵丝蛋白抗体，对侵袭性感染的诊断意义更大。 了重复测定，结果重复性良好(表1) 我们已经用纯化的白念菌丝蛋白p47抗原建立了检测相应 抗体的EHSA法，并进行了临床应用，证明有较高的诊断价值1。 袁1 16倒患者多份血样重复测定结果 但由于菌丝抗原制备程序复杂，需要高营养培养基及苛刻的培养 条件，纯化菌丝蛋白时要进行超声处理及Con 析，蛋白得率较低，难以大量制备。 噬茵体肽库具有模拟天然抗原表位的功能【州。目前，以纯化 的单抗为靶标，筛选模拟抗原表位的应用最广泛也最为成熟，为 ’括号前的数字为检测次数；6其中1次测定结果为(一) 在未知条件下分离病原体的表位，或作为诊断试剂提供了广阔的 2．4临床初步应用 用模拟抗原作EuSA，检测了100名 应用前景。与噬菌体外壳融合表达的外源性片段可以模拟线性结 部队志愿献血者血清白色念珠菌茵丝蛋白p47抗体，2名阳性，阳 构和一级结构上不连续但具有一定空间结构的活性中心，这些模 性率2％；134例服用免疫抑制剂环孢素A的病人43例检出白色 拟表位能特异性地结台到抗体的结合区，但在氨基酸水平上与天 念珠菌蛋白p47抗体，阳性率33％，其具体结果见表2。 然表位不同。模拟抗原可以像天然抗原一样与相应抗体发生反 经x2检验证明，服用免疫抑制剂的3组患者检测阳性率无 应，或者刺激机体免疫系统产生免疫应答，因此在一些抗体检测 明显差异，P=462；健康人群(2％检出阳性)与病人组差异显著。 或者疫苗设计方面具有广泛的应用前景。本实验室用特异性单克 表2 134例服用免疫抑制荆环孢素A患者检测结果 隆抗体对噬菌体展示肽库进行淘筛，制备出白色念珠菌菌丝蛋白 模拟抗原。虽然对选出的6个克隆进行序列分析的结果显示其氨 基酸序列各不相同，但都在不同程度上与白色念珠菌特异性抗体 反应。 实验证明模拟抗原与p47具有相同的反应性，与抗白念菌 丝蛋白抗体具有较强的亲和能力，与感染者血清反应良好。我 注：各类肾炎包括慢性肾炎．慢性肾袁，肾病综合症；其他组包括多 们用模拟抗原建立的ELISA方法，其敏感性、特异与直接使用 发性骨髓瘤。系统性红斑狼疮等疾病。 3．讨论 诊为白色念珠菌侵袭性感染的患者血清，应用本法检测均为阳 白色念珠菌侵袭性感染的实验室诊断难度比较大mq，主要 性；17例仅痰培养阳性而血培养阴性患者应用本方法无一例 因为该菌是条件致病菌，在人体多部位栖息，经常引起浅表感染， 检出抗体，这说明痰培养阳性的患者并不意味着白色念珠菌的 临床分离阳性时不易判断是否致病；另外，