微型固相萃取柱预处理胆固醇氧化物地研究.pdfVIP

A09 微型固相萃取柱预处理胆固醇氧化物的研究 张明霞周建科’梁俊红 (河北大学理化分析研究中心，保定。071002) 摘要：本文研究了自装的微型SPE固相萃取小柱(柱填料仅为20mg)从大量 花生油和胆回醇中分离、富集胆固醇氧化产物，效果良好． 关键词：固相萃取胆固醇氧化物毛细管气相色谱法花生油 OxidationProductsi 现有胆固醇氧化产物(Cholesterol COPs)分析样品处理法一般经过 脂类提取、分离富集和衍生反应三个步骤，其中最关键的步骤是COPs与脂类的分离和富集， 常通过皂化或固相萃取法来实现。据文献报道热皂化会促使环氧化胆固醇和7-酮基胆固醇的 Phase 分解IjJ。而冷皂化需放置16-24小时目，耗时太长。SPE(SolidExtraction)圃相萃取法 可避免皂化过程中COPs的降解，尤其是一次性SPE固相萃取柱提高了数据的可重复性。但 一次性SPE固相萃取柱价格较高．柱填料多为300mgI卅或500m一41，使分析费用很高。为分 离和检测富含胆固醇的油煎或油炸食品中COPs，我们实验了自装的微型SPE固相萃取小柱(柱 填料仅为20rag)从大量花生油和胆周醇中分离、富集COPs。效果良好。大大减少了COPs 标准品及其他试剂的消耗，同时也缩短了分析时阉，减少了有机溶剂对环境的污染。 l实验部分 1．1仪器与试剂 Varian 3400气相色谱仪，1075分流环分流注样器．FID检测器；SP4290M积分仪。 胆周醇、5a。6CI．环氧化胆固醇、5t8，6B．环氧化胆固醇、6_酮基胆固醇、7．酮基胆固醇、 25-羟基胆固醇和313，5a，6 B-胆甾烷三醇及衍生试剂Mo取(三甲基硅烷)三氟乙酰胺均 购自Sigma公司，标液均用正己烷配制。其它试剂均为分析纯，花生色拉油。硅胶H60型。 1．2SPE固相萃取小柱的准备 自制微型SPE固相萃取拄(1．5mmi．dxl5cm)，硬质玻璃，两端磨口，可和注射器连接， 并可相互联接。用干法装柱，硅胶装入量为20mg，柱床高度4．3cm，两端用少许净化过的玻 璃棉固定，0．5mL正己烷活化。保证每次装柱使柱填料量和柱床高度保持一致。 1．3预分离与净化 。 将胆固醇、胆固醇氧化产物和花生油制成混台标液假固醇浓度100p．g／mL，6种COPs浓 度均为10}lg／mL，花生色拉油10．20mg／mL)。取200gL此混合液注入小柱内，用注射器控制 1 mL正己烷，乙酸乙 流速为0．5mL／min。然后依次用0mL正己烷，乙酸乙酯=95／5(v／v)，0．3 酯=90，10(v／v)、0．2mL正己榭乙酸乙酯=80／20(v／v)混合溶剂和0．3mL丙酮洗脱，前面洗 脱液均弃去，丙酮洗脱液收集到小管内做衍生反应和气相色谱分析。 2结果与讨论 2．1洗脱剂及洗脱体积的选择 文献p】所载分离、富集lg鸡蛋粉中的COPs所用SPE固相萃取柱硅胶含量300mg，系列 洗脱剂总用量为55mL。我们用自浆20mg硅胶小柱，首先实验了用丙酮洗脱COPs标液， 取200乩混标注入SPE柱内，1．2rIlL丙酮进行洗脱，洗脱液每隔0．1mL接入一小反应管， 3 虽后确定COPs最佳洗脱体积为0mL。同法用正己烷，乙酸乙酯=80／20(v／v)混合溶剂洗脱 200皿COPs和胆固醇的混合标液，晟佳洗脱体积确定为O．2mL。最后确定花生油、胆周醇及 COPs混合样品中的中性脂、磷脂需要依次用极性更小的混合溶剂：0．1mL正己烷，乙酸乙酯 --95／5(v／v)和0．3mL正己烷／乙酸乙酯--90／10(v／v)进行洗脱，我们的微型柱洗脱剂总量才 0．9mL，远远低于现有文献报导值。 2．2COPs色谱分离检测 未经SPE小柱净化的花生油、胆固醇及COPs棍合样气相色谱分析图见图1．由图l可见杂峰 太多，且胆固醇出现平顶峰。经过SPE小柱分离富集后的COPs色谱图见图2，可见6种COPs 以及和胆固醇之间分离均非常好。没有杂峰干