植物水解酶法测定环境中有机磷农药残留地研究.pdfVIP

———— 塑堡墅垄兰圭查塑堡芝 檀物水解酶法测定环境中有机磷农药残留的研究 康天放赵华 (北京工业大学环境与能源工程学院 100022) 摘要：分别以9428号、9583号小麦为酶源提取了植物酯酶，将其用于酶抑制分光 光度法检测蔬菜中的有机磷农药残留，获得了较满意的结果。 关键词：环境监测：分光光魔法；植物酯酶；有机磷农药 我国是农药使用大国，年使用量居世界首位，其中有机磷农药使用量^全部农药用 量的70％以上，并且广泛应用于蔬菜、水果等作物【l】，一些有机磷农药的化学性质很稳 定，会在环境中长期残留，就近几年的检测结果看，国内最好的地区也有5％的农产品农药 残留量超标，严重的地区高达85％跚，为加强环境保护、保障食品安全，开展对农药残留 的环境监测显得非常重要。目前基于酶抑制原理的分光光度法是r。类比较常用的快速检 测农药残留量的方法o】。所用酶源主要从动物和植物中提取。不同种类的酶对该方法的灵 敏度影响很大，一般说来，动物酯酶稳定性差，且个体差异性大原料较昂贵。用植物酪酶 就相对稳定些，个体差异也比较小，能满足廉价检测的目的。本文以两种小麦为酶源，从 中提取植物酯酶，并且应用于不同有机磷农药的检测。 一、实验部分 9428号、9583号小麦均购自北京市种子公司，2，6二氯靛酚钠盐(购于国药集团化 学试剂有限公司)，按文献口l方法合成2，6二氯靛酚显色剂，农药为50％对硫磷乳油(天 津市人民农药厂)、40％氧化乐果乳油(河北新兴化工有限责任公司)、40％辛硫磷乳油(山 东和乐集团乐陵农药厂)，分别以丙酮为溶剂配制浓度为lOOmg／L标准贮备液，置于冰箱， 使用时按需要逐级稀释，配制成适当浓度的标准溶液，农药浓度根据所标示的有效成分 计算。实验所用植物酯酶通过多功能食品加工机(上海海菱电器有限公司)加工小麦制 取，所有分光光度实验均在722、光栅分光光度计(上海第j三分析仪器厂)上进行。 将小麦洗净，用蒸馏水作提取液。小麦与水的比例为1：4，在4℃下浸泡2011，用食 品加工机加工制汁，将汁倒出，然后以4000r／min的速度离心lOmin，将上清液过滤，即 得小麦酯酶，贮于冰箱。以上操作均在0～4。C下进行。 在本研究中，橙色的2,6二氯乙酰靛酚在植物酯酶的水解作用下生成乙酸和蓝色的2,6 j氯靛酚，反应前后溶液的颜色变化很大，容易鉴别；若样品中含有农药时，植物水解酶 的活性受抑制，2,6二氯乙酰靛酚水解速度变慢或不水解，反应溶液变成浅蓝色或不变色。 酶被抑制的程度不同，溶液颜色就不同。在lcm比色皿中依次加入2．5mL磷酸盐缓冲液、 0．5 入o．25 专题6环境监测技术 怕磷酸盐缓冲液代替农药溶液，按照上述方法测得空白溶液的吸光值。按_F式计算抑制百 分率。 抑制率(％)：兰生丘二些虹×100 峨。 式中AAi自表示显色前后空白溶液的吸光值变化；△A样日表示样品的吸光值变化。 当采用9583号植物酶时，也按上述方法进行操作。 二、结果与讨论 (一)酶反应的最适条件 酶活性受诸多因素影响，因此酶反应条件十分苛刻。在反应物和酶量一定的情况r， 影响最大的因素是pH值、反应温度、反应时间。本文分别研究了这些因素与酶活性的关 系，找出了两种酶的最佳反应条件如表1所示。 表1酶反应最佳条件的确定 焦塑墼墨整 笆堕 星蜜遵匡!．旦! 星廛堕鲤!卿1 9428号 7．8 35 35 (二)不同农药对植物酯酶的抑制作用 在9428号小麦酯酶最优反应条件下，分别考察不同浓度的对硫磷、辛硫磷、氧乐果 对酶的抑制程度，用抑制率对农药浓度的对数值作图，绘制关系曲线(见图1)，结果表 明在一定浓度范围内(0．01～10mg／L)，抑制率与农药浓度的对数基本成线性关系。 H