用双酶电化学生物传感器检测对硫磷地研究.pdfVIP

第二届全国环境化学学术报告会论文集 用双酶电化学生物传感器检测对硫磷的研究 康天放闰骏高慧丽 北京工业大学环境与能泺_y-程学院，北京， 100022 ，辱套 摘要I陋过交联方法将胆碱氧化醇直接固定于铂盘电板表面，用戊二醛熏蒸法固定乙酰胆碱酯酶于Pall 膜上，再将谊膜固定于胆碱氧化酶膜表面，制成双酶电化学生物传感器．优化了制备生物传感嚣的实验条 件．)百分抑制率与对硫磷浓度的对数值之间在对硫磷浓度为1．o×1019几到l_o×10‘g几之间存在线性关 系，检测限为2．4×1019／L． 关键词：生物传感器，胆碱氧化酶，乙酰胆碱酯酶，对硫磷 0 前言 近年来，食品安全已成为人们关注的热点问题，开发用于蔬菜、水果等样品中农药残 留的快速检测技术对防止受农药污染的农产品进入销售市场有着重要意义+本文以对硫磷 作为有机磷农药的模型分子，研究了利用固定化胆碱氧化酶(ChO)和乙酰胆碱酯酶(ACHE) 的电化学生物传感器检测有机磷农药残留的方法，取得了满意结果． 1 实验部分 1．1主要试剂材料与仪器 氯化乙酰胆碱购自北京化学试剂公司，对硫磷由农业部农药检定所提供，其它所用试剂均 为分析纯，Pall膜(孔径：o．45iim，厚度：150um)购自Pall公司，溶液用二次蒸馏水 配制．所有电化学实验均在CHI660A电化学工作站(上海辰华仪器公司)上完成，实验 采用三电极系统，以固定了ChO和AChE的铂盘电极(直径4mm)为工作电极，饱和甘汞 电极(SCE)和铂片电极分别作参比电极和对电极． 1．2生物传感器的制备 准确吸取20u u L浓度为10U／mL的ChO溶液和2L浓度为1％的牛血清白蛋白(BSA) u 溶液，混匀后滴加到铂盘电极表面，滴加2 L浓度为5％的戊二醛溶液，室温下风干，制 mol／L 得ChO电极．用0．1 pH7．4的磷酸盐缓冲溶液配制浓度为25V／mL的AChE溶液， u 吸取60L该溶液与6uL浓度为1％的BSA充分混匀后，吸取该混合溶液22uL于直径为6 m的Pall膜上，风干后，置于自制的架子上，用12．5％的戊二醛室温下熏蒸3h，然后将 Pall膜酶面朝外，用0型圈固定在Ch0电极上．此双酶电极含有0．2u的ChO和0．5U的 AChE，置于4℃保存各用．实验中用1％的2-PAM对酶电极上受到有机磷农药抑制的AChE 活化10min，每片固定了AChE的Pall膜可以重复使用10～15次． 2 结果与讨论 2．1有机磷农药在乙酰胆碱酯璃和胆碱氧化酶电极上的响应原理 在AChE的催化作用下，氯化乙酰胆碱水解为氯化胆碱和乙酸，氯化胆碱在ChO的催 芦即 第二届全国环境化学学术报告会论文集 化作用下与溶解氧反应生成甜菜碱和H202，当反应生成的H：02扩散到作阳极的铂盘基础 电极上时被电化学氧化，利用H202在基础电极上的的氧化电流的大小，可以间接测定有 机磷农药的含量．这些农药的含量越高，对AChE的抑制作用就越强，所生成的氯化胆碱 的浓度就越低，生成的H202浓度也就越低，因此，H202的氧化电流信号就越小．在恒电 位条件下，记录静止溶液中H202的氧化稳态电流kl，然后加入含有机磷农药的溶液，记 录衰减后的稳态电流i。2，按以下公式计算百分抑制率(肠)…： ，％=【(is。1一iss2)／i“l】×100％ 22生物传感器制备条件的优化 将所制备的Ch0电极置于0．imol／L pH7．4的磷酸盐缓冲溶液中，于0．4V进行安 培法实验，测定ChO／Pt电极在一系列不同浓度的胆碱溶液中的稳态电流．考察了ChO的用 量对ChO电极响应性能的影响．当ChO的用量为0．2 U时，响应最灵敏，故确定ChO的最 佳用量为0．2U．由于戊二醛蒸汽容易均匀地扩散到酶膜表面，所以熏蒸法对于大批量生 产生物传感器是一种简便而易于控制的固定酶的方法，近年来受到人们的重视”1．本文采 用熏蒸法固定