实验教学中双向琼脂扩散法的改进。.pdfVIP

实验教学中双向琼脂扩散法的改进。.pdf

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第25卷第2期 赣 南 医 学 院 学 报 V .25ND.2 2005年4月 OURNALOFGANNANM匮DICALcoII GE . 2005 实验教学中双向琼脂扩散法的改进。 张文平,钟有添,王小丽 (赣南医学院病原生物学教研室。江西赣州 341ooo) 摘 要:目的:探讨改进后的双向琼脂扩散试验的可行性。方法:在含0.1tag/ml的溴酚蓝的凝胶琼脂板上,以鸡卵 白蛋白为抗原,鸡卵白蛋白免疫血清为抗体进行双向琼脂扩散试验。结果:出现典型的沉淀线且与凝胶背景之间 的反差明显。结论:加一定浓度的溴酚蓝可提高双向琼脂扩散试验的敏感性;鸡卵白蛋白及其免疫血清既经济又 安全,可作为教学实验中双向琼脂扩散试验的实验材料。 关键词:双向琼脂扩散法;教学实验;溴酚蓝 中图分类号:G642.423 文献标识码:A 文章编号:1001—5779(2O05)02—0283—02 双向琼脂扩散试验是医学微生物与免疫学中的 注射针头挑出孔内琼脂块。 一 种常用血清学试验。其原理是利用可溶性抗原抗 体在半固体琼脂凝胶内扩散,若抗原抗体对应,且二 者比例合适,在其扩散的某一部分就会出现白色的 沉淀线…1。由于介质琼脂凝胶在较低浓度凝固时 呈乳白色,而抗原一抗体复合物的沉淀线也呈白色 或乳白色,二者颜色接近,给观察带来一定的困难; 附图 凝胶琼脂板 特别是在沉淀线比较弱时,难以辨别。因此,本实验 1.4 加样 中间孔加鸡卵白蛋白(已知抗原),周围 以自制的鸡卵白蛋白及其免疫血清为实验材料,并 孔可根据试验需要加抗鸡卵白蛋白血清(已知抗 在琼脂凝胶中附加一定浓度的溴酚蓝进行了双向琼 体)、待检血清(不同浓度的抗鸡卵白蛋 白血清)、阴 脂扩散试验,以探讨和改进该试验方法的敏感性和 性对照血清,于37℃下保温24--48h,观察沉淀线。 可行性。现将试验结果报告如下。 ’ 2 结 果 1 材料与方法 含有溴酚蓝的凝胶琼脂板呈淡蓝色,与抗原一 1.1 鸡卵白蛋白及制备 无菌条件下取新鲜的鸡 抗体复合物形成的白色沉淀线有较大的反差,容易 蛋清,2000rpm离心 10rain,弃上层泡沫,4℃保存。 观察;即使在沉淀线较微弱的情况下,透过光线也能 1.2 实验动物及免疫血清的制备uJ 家兔 10只, 辨别。 体重 2.5kg左右,雌雄并用,由本院动物室提供。鸡 卵白蛋白用无菌生理盐水 1:10稀释,分别经耳缘静 3 讨 论 脉免疫家兔。程序如下:第 1日,lIT1l/只;5日末、10 双向琼脂扩散法常用于分析和鉴定标本中多种 日末、15日末分别加强免疫,lml//Ⅱ;22日,所有家 抗原成分或者血清的组分及效价等。但传统方法直 兔于无菌条件下采心脏血。常规分离血清备用。 接采用透明的琼脂凝胶作为介质,背景颜色与抗原 1.3 凝胶琼脂板

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