水稻稻曲病拮抗菌的筛选和抗性研究.pdfVIP

第九届全国微生物学教学和科研及成果产业化研讨会 湖南师范大学 水稻稻曲病拮抗菌的筛选及抗性研究 兰时乐陈海荣肖宏英刘小玲江来辉 (湖南省微生物研究所长沙410009) 摘要：试验筛选出对水稻稻曲病具有防治效果的18株细菌，在离体条件下测定它们对水稻稻曲病菌的 拮抗能力。选用其中拈抗作用较强的2个菌株AI、H一5l，分别进行了抑菌率、致畸性、对孢子的萌发影 响以及菌株对水稻的促生性进行了试验，结果表明，发酵液对水稻稻曲病菌的抑制率最大分别为67．66％ 和62．8％，对病菌分生孢子的萌发抑制率分别为77 37％和59．74％，但对水稻的促生作用不明显。 关键词：拈抗菌，水稻稻曲病，生物防治 水稻稻曲病(Ustilaginoidea 产区分布较为广泛且日趋严重Il‘2’3’4]o自上世纪八十年代以来，稻曲病在我国的发生面积明显增大， 不仅危害稻谷，而且引起人畜慢性中毒p’6J。目前国内外主要采用化学农药进行防治[7．8．91，虽然取得 了一定效果，但也带来了药物残留、污染环境、病原菌抗药性产生等问题。近年来，利用拮抗性微 生物防治植物病害的研究进展较快。在水稻纹枯病、白叶枯病、棉花黄萎病、黄瓜枯萎病、辣椒疫 道。本研究针对湖南省稻曲病的发生规律，进行拮抗细菌的筛选和室内拮抗性研究，以期为稻曲病 的生物防治提供科学依据。 1材料和方法 1．1材料 病原菌：稻曲病菌，采自发病严重的稻穗，由作者分离保存。 分离物样品：采集的稻田表层土样、水稻根际土样和稻曲病粒。 供试水稻品种：威优64，购于市场种子专店。 1．2试验方法 1．2．1拮抗菌株的分离与纯化 将稻田表层土样、水稻根际土样准确称取109放入100mL带玻璃珠的无菌水中，按浓度梯度法 长出菌落后，挑取菌落形态相异的单个菌落，经反复纯化后，保存于LB斜面上待测。 将采集的稻曲病粒用无菌水反复冲洗5次后，直接接入LB平板中央，培养24h，分离、纯化病 粒四周的细菌。 1．2．2 分离菌株拮抗作用测定 所有分离保存的细菌通过双培养法测定其对稻曲病菌的拮抗活性，具体方法参见文献㈨”1。选 择生长较快、抑菌作用较好的菌株备用。 1．2．3拮抗菌对稻曲病抑菌率的测定 将分离纯化的菌株用LB液体培养基培养至产生芽孢后，离心收集上清液，用G6型沙芯漏斗去 除残余菌体，制得无菌滤液。用打孔器打取06ram的PSA培养基培养的稻曲病菌边缘菌块，于用无 菌水系列稀释的无细胞液中浸泡30s后， 兰时乐等：水稻稻曲病拈抗菌的筛选及抗性研究 161 置于PSA平板上28℃培养72h，同时用无菌水设对照，每处理重复三次，测量 菌落直径大小。按下式计算不同菌株的抑菌率。 抑菌率(％)=对照菌落直径一处理菌落直径／对照菌落直径×100 1．2．4拮抗菌株发酵液对稻曲病菌丝的致畸作用 成芽孢后，离心，收集上清液，用G6型沙芯漏斗制得无菌滤液。按1：4比例与冷却至室温的PSA 下观察。 1．2．5拮抗菌发酵液对稻曲病孢子萌发的影响 斜面培养6d的稻曲病菌，用无菌水调制成孢子悬浮液滴加到凹玻片上，风干，再滴加发酵上清液， 以滴加无菌水的处理为对照，每处理重复5次，置于28C恒温箱中进行孢子萌发试验，48h后镜检 萌发结果，并计算孢子萌发率。 1．2．6拮抗菌促生作用的测定 将培养的拮抗菌发酵液用无菌水调整细胞浓度为108cfu／mL，然后加入59种子，室温下浸泡12h， 50株稻苗洗去根部泥土，计算发芽率，并测量株高和根长。以清水浸种为对照。 2 结果与分析 2．1拮抗菌的分离 从不同稻田土壤中分离出114个细菌菌 株，其中有18个菌株对【詹ffj铅伽。汝。，n。。． 查!苎苎竺苎竺苎竺苎 (cke)Tak表现了明显的拮抗作用。经过离体 测定，有2个菌株对稻曲病菌有较强的抗性 (Al、H--51)占1．75％；拮抗能力中等的菌 株4个，占3．5l％；略有拮抗能力的菌株12 个，占10．53％，但从稻曲病粒上分离的5个 菌株，未表现拮抗作用。