枣类菌原体(MLO)脱除方法和影响茎尖分化效果的研究.pdfVIP

2002年4月 】} 肃 农 业 大 学 学 报 少 all27-32 JOURNALOEGANSU AGRICULTURALUNIVERSITY 枣类菌原体(MLO)脱除方法及影响 茎尖分化效果的研究 陈佰鸿 (甘肃农业大学园艺系，兰州 730070) 摘要:以具有明淤枣疯病症状的 1-2年生晋枣根孽苗为试材.采用攀尖培养和茎尖培 养与热处钾相结合的方法进行了枣类菌原休(MLO)脱除研究结果表明:茎尖的分化率随切 取茎尖的增大而提高，但脱毒效果随苹尖的增大而降低;采用45-50℃处理60mim后热处 理后.切取0smm的茎尖可以达到完全脱毒培养的目的，但热处理过程中部分茎尖因高温 伤害会降低分化率。培养温度在 15一25C时茎尖的枯死率与温度的变化幅度不明旅，达25 ℃以 卜时，+占死率显著增大;IAA和13A对枣茎尖的分化有明显抑制作用。茎尖分化率在不 添加任何激素的11培养基上最高达54.5%;添加250mg/L水解乳蛋白具有提高4.尖分化率 的作用。 关健词:枣;类菌原体;苹尖培养:热处理:分化率 中图分类号 S66X5 文献标识码:A 文章编号:1003-4315(2002)01-0027-06 枣(ZiziphusJujubaMill.)原产于黄河流域，是我国特有的果树。枣疯病是枣树唯一的 病毒性病害，其病原为类菌原体(MLO),山于枣树采用传统的无性fiYTI，加剧了枣疯病的传 播与蔓延，而采用栽培措施和病害防治技术难以奏效，对枣树生产造成了很大的危害。采 用组织培养手段培育脱毒苗是防治该病唯一有效的途径。本文就枣类菌原体(MLO)脱除方法 及影响茎尖分化效果的因素进行了研究，以便为培育和生产无毒苗提供了技术依据。 】 材料与方法 1.1材料 供试材料为秋冬季节采集的具有明显枣疯病症状的1-2年生晋枣根辈苗。 1.2 方法 1.2.1 茎尖培养脱除MLO 将根孽苗用肥皂水测洗后，再用自来水冲洗干净，剪成单 芽茎段，转移到超净工作台上先用70%酒精消毒30s,再用0.1%的HgCIJ消毒10-1: }nim,然后用无菌水冲洗3次，在解剖镜下剥取0.1一1.0mm茎尖分生组织进行接种。剥离 收63日期:20112-01-25 II 肃 农 业 大 学 学 报 2002 茎尖分生组织时，镊子及解剖针每次用完后均经灼烧灭菌，保存在75 酒精中待用，解 rJfl刀用0.1%HgCl=消毒15mim再用蒸馏水冲洗后待用。 1.2.2热处理与茎尖培养结合脱除MLO 将根孽苗剪成 15-20cm长的枝段，用肥皂水 删洗和自来水冲水后，置于恒温水浴锅内进行热处理，水温保持在45一500C，处理60mim 后，进行表面灭菌。剥取0.3^-I.0mm的茎尖培养。方法同1.2.10 1.3培养羞和培养条件 培养丛为:H+IAA0-0.8mg/L+gA0一1.0mg/L+LH0-500mg/L 培养条件:温度 15-30℃，光照1500-2000Lx,16小l1寸光照，空气相对湿度70% 2 结果与分析 2.1堵养沮度对茎尖分化的影响 培养温度对茎尖的分化和生长有明显的影响，在 15^30℃温度范围内，随温度的 升高，茎尖的分化速度加快，但茎尖枯死率也随之升高。在巧~加 ℃茎尖的分化速度虽然 较慢，在接种后第12天开始分化，但枯死率最低仅为32 ;在20^25℃，茎尖的分化速 度较快，在接种后第7天开始分化，枯死率较低为34%;在25-30℃茎尖的分化速度最 快，在接种后第4天开始分化，但枯死率显著提高达84 (见表 1)o 表. 不同培养沮度对晋枣茎尖分化本的形晌 接种茎 茎尖大 牛占死率 开始分 温度/T 尖数/个 小/mm 7s}}c1瞥 i}ik}[代犷 /% 化期/d 一 15- 20