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特邀专题报告 85 0 ZT03010 猪重要细菌病基因工程疫苗研究进展 金梅林张安定 贝韦成康超石 健周明光吴斌陈焕春 (华中农业大学湖北武汉430070) 前言 我国是养殖大国，猪的数量居世界首位，2010年生猪出栏6．67亿头，约占世界总数的50％。但我国 并不是畜牧业强国，畜牧业的经济效益远没有达到世界平均水平，究其原因主要是动物疫病问题。动物 疫病的不断发生给我国畜牧业造成了巨大的经济损失，是制约畜牧业发展的重要因素，也给人类的生命 健康带来了严重的威胁。“猪粮安天下”就充分诠释了生猪产业对我国社会、经济的重要意义。 据统计，动物传染病引起动物死亡造成的直接经济损失每年达300亿元以上，引起饲料、药物、人 工浪费等间接经济损失上千亿元。而人和动物传染病一半以上是由细菌引起，尤其是近年来，伴随养殖 业的现代化，畜群饲养高度集中，调运频繁，细菌传染病的侵袭更加严重，危害也日益加剧。抗生素的 发现及其在畜禽养殖业中的应用一度使人们忽视了细菌性传染病的危害。长期以来，抗生素被广泛应用 于畜禽疾病的防治及动物促生长，却促使了耐药菌株的快速进化。目前，临床上耐多种药物的细菌已屡 见不鲜，严重影响了抗生素的治疗效果。近来，源于印度、巴基斯坦的新型“超级细菌”，再次触动了 全球民众敏感的神经，鸣响了公共卫生警报。作为耐药性问题十分严重的国家，我国应立即行动，采取 各种强有力措施，彻底改变滥用抗生素的现状。有识之士早已认为，高效、安全、方便的生物制剂必将 成为未来促进畜牧业可持续性发展、保证人民健康的重要工具。因此，采用疫苗免疫预防控制细菌性传 染病的发生和流行势在必行。 当前，猪链球菌病、副猪嗜血杆菌、猪传染性胸膜肺炎等细菌性传染病流行明显增加，对我国规模 化养殖业已造成严重危害。传统的灭活疫苗免疫，虽在预防和控制传染病过程中起到了重要的作用。但 由其免疫效力不佳，多次注射易产生免疫耐受，全菌灭活含有很多不相关的和有毒的成分造成的副反应， 制苗过程易造成病原逃逸等问题，急需新型的安全、高效的疫苗。基因工程疫苗与目前应用的常规疫苗 相比，具备安全性好、生产成本低廉、具有产生非特异性免疫及特异性免疫反应的能力，通过特异性分 子标记物可建立鉴别野毒的技术，对病原清除、净化提供了配套的检测方法。随着现代生物学技术日新 月异的发展，尽管目前基因工程疫苗研究尤其是动物细菌性基因工程疫苗还未获得全面突破性进展，但 由于传统疫苗的缺陷和基因工程疫苗的潜在优势，基因工程疫苗逐渐成为疫苗研究的热点，具有广阔的 前景。目前利用基因工程技术已经和正在研制开发的新型疫苗主要有基因缺失疫苗、活载体疫苗、亚单 位疫苗、合成肽疫苗、DNA疫苗等。 本研究小组针对目前国内流行的几种重要的细菌疾病进行基因工程疫苗方面的研究，为我国细菌疾 病的基因工程疫苗研究提供一定的基础。现将主要内容叙述如下： 1 活载体基因工程疫苗研究 ． 该类疫苗免疫动物向宿主免疫系统提交免疫原性蛋白的方式与自然感染时的真实情况很接近，可诱 导产生的免疫比较广泛，包括体液免疫和细胞免疫，甚至黏膜免疫。用基因工程方法构建载体，并同时 插入多个外源基因，就可以达到一针防多病的目的。简言之，病毒活载体疫苗兼有常规活疫苗和灭活疫 苗的优点。它具有活疫苗的免疫效力高、成本低等优点。 86嵋》2011年学术年会 1．1 猪链球菌2型重组马腺疫链球菌兽疫亚种二价基因工程疫苗研制 本研究在系统鉴定猪链球菌保护性抗原的基础上，筛选猪链球菌2型的保护性抗原SAO、HP0197、 MRP，并以马腺疫链球菌兽疫亚种的类M蛋白基因作为重组靶位，将猪链球菌2型的保护性抗原SAO、 HP0197、MRP分别构建入马腺疫链球菌兽疫亚种弱毒菌株中。并通过PCR及酶切方法对菌株进行鉴定， 并利用SDS．PAGE以及WesternBlot证实保护性抗原基因的成功表达。所构建的重组菌株生长、生化特性 及以遗传特性稳定，安全。不仅能产生针对马腺疫链球菌兽疫亚种的抗体，且能产生针对猪链球菌2型 保护性抗原的特异性免疫应答。小